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【題目】利用基因工程技術培育轉基因抗凍番茄,該過程需要用多種限制酶,如圖依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三種限制酶的識別序列及切割位點,

請回答:

(1)上述限制酶在特定位點切割DNA,其實質是斷開DNA分子每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的_________,切割后產生了_________末端。

(2)利用EcoR I 和Nae I酶切得某種魚的抗凍蛋白基因,可與被EcoR I 和Sam I酶切后的質料連接成重組質料,原因是______________________________________________________。

(3)重組質粒導入番茄后,欲檢測抗凍蛋白基因是否轉錄出mRNA,需利用_________作探針。

(4)利用抗凍蛋白制備出相應的_________,然后進行抗原-抗體雜交,觀察到雜交帶出現(xiàn),尚不足以確定轉基因抗凍番茄培育是否成功。因此,還應將轉基因番茄_________,以確定其耐寒能力是否提高。

(5)應用PCR擴增目的基因時,需要在基因組數(shù)據庫中查詢目的基因的_________序列,以便合成引物。PCR過程第一輪循環(huán)的模板是____________________________________。

【答案】 磷酸二酯鍵 黏性末端和平末端 相同的黏性末端之間可連接,且不同的平末端之間也可以連接 標記的含有目的基因的DNA片段(或“標記的抗凍蛋白基因”或“標記的含有目的基因的DNA單鏈”) 抗體 置于寒冷環(huán)境培養(yǎng)(或進行個體水平檢測或進行抗凍實驗) 核苷酸(或脫氧核苷酸或堿基) 目的基因的兩條脫氧核苷酸鏈(或目的基因)

【解析】試題分析:由圖可知,EcoRⅠ酶能切出粘性末端,SmaⅠ和NaeⅠ酶都能切出平末端,相同的黏性末端之間才可能連接,但不同的平末端之間也可能可以連接,因此要獲得抗凍蛋白基因,可以用EcoR I和Sma I切割或EcoR I和Nae I。

(1)限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,產生黏性末端和平末端
(2)EcoRⅠ酶切出粘性末端,SmaⅠ和NaeⅠ酶切出平末端,利用EcoRⅠ和NAE酶切得某種魚的抗凍蛋白基因,可與被EcoRⅠ和SamⅠ酶切后的質粒連接成重組質粒,原因是相同的黏性末端之間可連接,且不同的平末端之間也可以連接。
(3)欲檢測目的基因是否轉錄出mRNA,需利用標記的含有目的基因的DNA片段作探針,進行核酸分子雜交,若出現(xiàn)雜交帶,說明目的基因是否轉錄出了mRNA。
(4)利用抗凍蛋白制備出相應的抗體,然后進行抗原-抗體雜交,觀察到雜交帶出現(xiàn),尚不足以確定轉基因抗凍番茄培育是否成功因此還應進行個體生物學水平的鑒定,將轉基因番茄置于寒冷環(huán)境培養(yǎng),以確定其耐寒能力是否提高。
(5)應用PCR擴增目的基因時,需要在基因組數(shù)據庫中查詢目的基因的核苷酸(或脫氧核苷酸或堿基)序列,以便合成引物.PCR過程第一輪循環(huán)的模板是目的基因的兩條脫氧核苷酸鏈(或目的基因)。

練習冊系列答案
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