Question

【題目】蛋白酶在全球酶制劑市場中銷售額達到60%以上，應用非常廣泛。許多細菌和霉菌都能產生胞外蛋白酶。芽孢桿菌是一類具有較高的產生蛋白酶能力的細菌，其芽孢休眠體對高溫和很多有毒化學物質都有很強的抗性。在一定條件下，從土壤中篩選高產蛋白酶芽孢桿菌的步驟如下：

（1）將土壤懸液置于75～80℃恒溫水浴中處理15min的目的是_________________________。

（2）牛奶培養(yǎng)基成分為：牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉、NaCl、瓊脂、水，其中提供氮源的是_________，用_________法將微生物接種到該培養(yǎng)基表面。

（3）從牛奶培養(yǎng)基上如何挑選出蛋白酶高產菌株?___________________________，這樣挑選的理由是_________________________________________________。

（4）根據相對分子質量的大小純化發(fā)酵后獲得的蛋白酶的有效方法是___________________。

（5）蛋白酶在加酶洗衣粉中應用最廣泛、效果最明顯的是_____________________。

Answer 1

【答案】殺死非芽孢細菌及其他微生物 牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉 稀釋涂布平板（或平板劃線） 挑選無色透明圈大的菌落 牛奶中蛋白質被蛋白酶水解后，會形成以蛋白酶產生菌為中心的無色透明圈，且蛋白酶高產菌株水解蛋白質能力更強，透明圈會更大 凝膠色譜法（或者分配色譜法） 堿性蛋白酶

【解析】

微生物的研究通常包含微生物的獲得、分離純化、培養(yǎng)以及保存等。微生物分離的基本步驟為配制培養(yǎng)基、接種、培養(yǎng)篩選等。微生物的實驗室培養(yǎng)，常用到培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。

（1）將土壤懸液置于75～80℃恒溫水浴中處理15min能殺死非芽孢細菌及其他微生物。

（2）作為構成生物體的蛋白質、核酸及其他氮素化合物的材料。把從外界吸入的氮素化合物或氮氣，稱為該生物的氮源。牛奶培養(yǎng)基成分為：牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉、NaCl、瓊脂、水，其中提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉。用稀釋涂布平板（或平板劃線）法將微生物接種到該培養(yǎng)基表面，比較透明圈的大小。

（3）牛奶中蛋白質被蛋白酶水解后，會形成以蛋白酶產生菌為中心的無色透明圈，且蛋白酶高產菌株水解蛋白質能力更強，透明圈會更大。因此挑選無色透明圈大的菌落即可挑選出蛋白酶高產菌株。

（4）凝膠色譜(凝膠層析)是一種液體柱色譜。利用這種方法，
可根據樣品中各種物質分子量大小的不同，
將樣品通過多孔膠床來達到分離的目的。故根據相對分子質量的大小純化發(fā)酵后獲得的蛋白酶的有效方法是凝膠色譜法（或者分配色譜法）。

（5）堿性蛋白酶在加酶洗衣粉中應用最廣泛、效果最明顯。