Question

18．請回答下列有關(guān)基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程方面的問題：
（1）若要使獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中含有人的干擾素，則所構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因的啟動子、人干擾素基因、終止子、標(biāo)記基因等．目前常用的措施是將該基因表達(dá)載體導(dǎo)入牛的受精卵（填“受精卵”或“乳腺細(xì)胞”），導(dǎo)入方法是顯微注射法．真正被用做載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上人工改造的．
（2）在“試管牛”的培育過程中，要使精子和卵母細(xì)胞在體外成功結(jié)合，需要對精子進(jìn)行獲能處理．另外，培養(yǎng)的卵母細(xì)胞需要發(fā)育至MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期），該時期在顯微鏡下可觀察到次級卵母細(xì)胞核第一極體．
（3）利用體細(xì)胞進(jìn)行核移植技術(shù)的難度明顯高于利用胚胎細(xì)胞進(jìn)行核移植的原因是體細(xì)胞分化程度高，不容易恢復(fù)全能性．
（4）運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以從哺乳動物的早期胚胎中獲得胚胎干細(xì)胞，首先必須用胰蛋白酶處理內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，去除表面的糖蛋白，使之分散成單個細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞是研究體外細(xì)胞分化的理想材料，胚胎干細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)，能夠維持不分化的狀態(tài)．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、受精前的準(zhǔn)備階段
（1）準(zhǔn)備階段1-精子獲能．剛剛排出的精子，不能立即與卵子受精，必須在雌性動物生殖道發(fā)生相應(yīng)的生理變化后，才能獲得受精能力．
（2）準(zhǔn)備階段2-卵子的準(zhǔn)備，動物排出的可能是初級卵母細(xì)胞也可能是次級卵母細(xì)胞，都要在輸卵管內(nèi)進(jìn)一步成熟，達(dá)到減數(shù)第二次分裂中期時，才具備與精子受精的能力．
3、胚胎移植的基本程序主要包括：①對供、受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體．用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理）；②配種或人工授精；③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存（對胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段）；④對胚胎進(jìn)行移植；⑤移植后的檢查．

解答 解：（1）基因表達(dá)載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動子、人干擾素基因（或目的基因）、終止子、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)等．培育轉(zhuǎn)基因動物時，常以受精卵為受體細(xì)胞，且將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法．真正被用做載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上人工改造過的．
（2）體外受精時，需要對精子進(jìn)行獲能處理．另外，培養(yǎng)的卵母細(xì)胞需要發(fā)育至MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期）．
（3）由于體細(xì)胞分化程度高，不容易恢復(fù)全能性，因此利用體細(xì)胞進(jìn)行核移植技術(shù)的難度明顯高于利用胚胎細(xì)胞進(jìn)行核移植．
（4）從早期胚胎中獲取胚胎干細(xì)胞后，必須用胰蛋白酶處理內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，使之分散成單個細(xì)胞．將ES細(xì)胞培養(yǎng)在飼養(yǎng)層細(xì)胞上或添加抑制因子的培養(yǎng)液中，能夠維持ES細(xì)胞不分化的狀態(tài)．在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子（或牛磺酸、丁酰環(huán)腺苷酸等），可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化．
故答案為：
（1）標(biāo)記基因    受精卵     顯微注射法   人工改造
（2）獲能   MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期）
（3）體細(xì)胞分化程度高，不容易恢復(fù)全能性
（4）糖蛋白  飼養(yǎng)層

點(diǎn)評 本題考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記核移植的具體過程；胚胎移植的基本程序；識記基因工程的具體操作步驟，掌握各步驟中的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．