Question

3．回答下列有關(guān)基因工程的問(wèn)題
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，將PVY-CP基因?qū)�入馬鈴薯，使之表達(dá)即可獲得抗PVY病毒馬鈴薯，而PVY-CP基因位于某種環(huán)狀DNA分子中．如圖1表示獲得抗病毒馬鈴薯的操作過(guò)程，其中①-⑧表示步驟，NPTⅡ基因是卡那霉素抗性基因，圖中農(nóng)桿菌不含此基因．表是圖中限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)．

（1）步驟②中Klenow酶能將DNA片段的粘性末端變成平末端，且DNA長(zhǎng)度不變，據(jù)此推測(cè)，其功能與下列酶的功能相同的是D
A．限制性核酸內(nèi)切酶     B．解旋酶     C．DNA連接酶     D．DNA聚合酶
（2）由步驟②所獲取的片段中，圖1中BamHⅠ的酶切位點(diǎn)位于C．

（3）由步驟③獲取的目的基因有1個(gè)粘性末端；步驟④中選用的限制酶是BglⅡ或SmaⅠ；經(jīng)步驟⑤所形成的結(jié)構(gòu)是重組質(zhì)粒．
（4）為了篩選農(nóng)桿菌，可以在培養(yǎng)基中加入卡那霉素進(jìn)行篩選．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得含目的基因的馬鈴薯細(xì)胞，進(jìn)而通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得抗PVY病毒馬鈴薯苗，最后進(jìn)行相關(guān)的鑒定．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是獲得抗病毒馬鈴薯的部分操作，步驟①～③是從質(zhì)粒A中獲取目的基因（PVY-CP）的過(guò)程；質(zhì)粒B是選用的運(yùn)載體；④過(guò)程需要用限制酶處理質(zhì)粒B；⑤表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，該過(guò)程需要DNA連接酶．

解答 解：（1）步驟②中Klenow酶能將DNA片段的粘性末端變成平末端，且DNA長(zhǎng)度不變，說(shuō)明Klenow酶能催化DNA鏈的合成，從而將DNA片段的粘性末端變成平末端．
A、限制性核酸內(nèi)切酶的作用是切割DNA片段，形成黏性末端，A錯(cuò)誤；
B、解旋酶的作用是將DNA雙螺旋解成單鏈，B錯(cuò)誤；
C、DNA連接酶的作用是連接DNA片段的黏性末端，C錯(cuò)誤；
D、DNA聚合酶的作用是催化DNA鏈的合成，D正確．
故選：D． 
（2）由于經(jīng)HindⅢ酶切割后，該DNA為鏈狀DNA，則末端D點(diǎn)為HindⅢ切割點(diǎn)，故圖1中BamHⅠ的酶切位點(diǎn)位于 C．
（3）據(jù)圖示可知，由步驟③獲取的目的基因一端平齊，一端為粘性末端，故共有1個(gè)粘性末端；由于目的基因只有一個(gè)粘性末端，故需選擇一種粘性末端相同的限制性內(nèi)切酶，另一種選擇平末端限制酶，故步驟④中選用的限制酶是BglⅡ或SmaⅠ；經(jīng)步驟⑤所形成的結(jié)構(gòu)是重組質(zhì)粒．
（4）為了篩選農(nóng)桿菌，可以在培養(yǎng)基中加入卡那霉素進(jìn)行篩選，卡那霉素抗性基因常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得含目的基因的馬鈴薯細(xì)胞，進(jìn)而通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得抗PVY病毒馬鈴薯苗，最后進(jìn)行相關(guān)的鑒定．
故答案為：
（1）D
（2）C
（3）1      BglⅡ或SmaⅠ重組質(zhì)粒
（4）卡那霉素  植物組織培養(yǎng)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖表，考查基因工程、植物組織培養(yǎng)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟，能分析流程圖，從中獲取有效信息準(zhǔn)確解答；能分析表格，明確BglⅡ和BamHI切割后形成的黏性末端相同；識(shí)記植物組織培養(yǎng)技術(shù)的過(guò)程及應(yīng)用．