Question

9．如圖為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的片段的示意圖．復(fù)制原點(diǎn)是質(zhì)粒能正常復(fù)制的必需組成．圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lcZ為藍(lán)色顯色基因，lacZ正常表達(dá)菌落呈藍(lán)色．EcoRⅠ、PvuⅠ為相應(yīng)的限制酶切割位點(diǎn)，括號(hào)內(nèi)的數(shù)據(jù)是該切點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離，單位為kb（1kb=1000個(gè)堿基對(duì)）．回答下列問(wèn)題：

（1）用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)該選擇質(zhì)粒質(zhì)粒B（填“質(zhì)粒A”“質(zhì)粒B”或者“質(zhì)粒C”），選擇的限制酶是PvuⅠ．
（2）轉(zhuǎn)錄的起始部位稱為啟動(dòng)子，是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識(shí)別與結(jié)合的部位．
（3）如果選擇的質(zhì)粒與目的基因重組成功，并且在受體細(xì)胞中能正常表達(dá)，則所形成的重組質(zhì)粒用EcoRⅠ完全酶切，并進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)的片段長(zhǎng)度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb．
（4）導(dǎo)入大腸桿菌后，為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入氨芐青霉素，形成的菌落顏色為白色．

Answer 1

分析 分析題圖：基因表達(dá)載體由啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因組成．質(zhì)粒A中缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C中的復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被酶PvuⅠ切割，所以用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)該選擇質(zhì)粒B．

解答 解：（1）含有目的基因的外源DNA中含有兩種限制酶的切割位點(diǎn)，但用限制酶EcoRⅠ切割會(huì)破壞目的基因，因此只能選擇限制酶PvuⅠ進(jìn)行切割．質(zhì)粒A中缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C中的復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被酶PvuⅠ切割，所以用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)該選擇質(zhì)粒B．
（2）轉(zhuǎn)錄的起始部位稱為啟動(dòng)子，是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)構(gòu)的部位．
（3）質(zhì)粒長(zhǎng)度為2.7kb，目的基因長(zhǎng)度為4.0kb，所以重組質(zhì)粒長(zhǎng)度為6.7kb，目的基因與運(yùn)載體重組時(shí)可能會(huì)正向連接，也可能會(huì)反向連接，因此所形成的重組質(zhì)粒用EcoRⅠ完全酶切，并進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)的片段長(zhǎng)度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb．
（4）用限制酶PvuⅠ切割會(huì)破壞質(zhì)粒B中的lcZ基因，但不會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入大腸桿菌后，為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入氨芐青霉素，形成的菌落顏色為白色．
故答案為：
（1）質(zhì)粒B              PvuⅠ
（2）啟動(dòng)子                識(shí)別與結(jié)合
（3）3.6kb、3.1kb         1.1kb、5.6kb
（4）氨芐青霉素          白色

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．