Question

【題目】動物細胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限,使遠緣雜交成為可能。現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種研究工作中,特別是新發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù),為制備單克隆抗體開辟了新途徑。研究表明DNA合成有兩條途徑:“S途徑”和“D途徑”,淋巴細胞(B淋巴細胞)有“S途徑”和“D途徑”;骨髓瘤細胞只有“D途徑”;HAT培養(yǎng)液中氨基喋呤可以阻斷DNA合成的“D途徑”。下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖�；卮鹣铝袉栴}:

（1）_______、_______技術(shù)是制備單克隆抗體的基礎(chǔ)。

（2）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比,最大的優(yōu)越性是_________。

（3）雜交瘤細胞既具備骨髓瘤細胞的____________________________的特點,又具備淋巴細胞的_______的特點。

（4）圖示用HAT培養(yǎng)液篩選出雜交瘤細胞的過程中,融合的淋巴細胞(B淋巴細胞)在HAT培養(yǎng)液中不生長的原因是_________,融合的骨髓瘤細胞在HAT培養(yǎng)液中不生長的原因是_____________________________________________

Answer 1

【答案】動物細胞融合 動物細胞培養(yǎng) 特異性強、靈敏度高,可大量制備 在體外大量增殖(無限增殖) 分泌特異性抗體 缺乏在體外培養(yǎng)液中增殖的能力 其DNA合成途徑被氨基喋呤阻斷而不能進行DNA復(fù)制

【解析】

單克隆抗體制備過程中兩次篩選的方法及目的：

項目	第一次篩選	第二次篩選
篩選原因	誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細胞，另外還有未融合的細胞	由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細胞
篩選方法	用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細胞和同種細胞融合后形成的細胞（“BB”細胞、“瘤瘤”細胞）都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞（“B瘤”細胞）才能生長	用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群
篩選目的	得到雜交瘤細胞	得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞

（1）制備單克隆抗體過程為：將能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，獲得既能產(chǎn)生抗體、又能無限增殖的雜種細胞，然后將其在體外或體內(nèi)條件下大規(guī)模培養(yǎng)，獲得大量特異性抗體。因此單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)是細胞培養(yǎng)技術(shù)和細胞融合技術(shù)。

（2）與常規(guī)的血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點在于它的特異性強、靈敏度高，并可能大量制備。

（3）雜交瘤細胞是骨髓瘤細胞和淋巴細胞融合形成的雜種細胞，具備兩種細胞的特點，既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。

（4）HAT選擇培養(yǎng)基含有次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶，其中氨基喋呤可阻斷DNA合成的主要途徑。主要途徑阻斷后，依靠應(yīng)急途徑，即在HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶）和TK（胸苷激酶）的作用下，利用胸腺嘧啶和次黃嘌呤合成DNA，缺少其中一種，DNA合成都不能發(fā)生。用于雜交的骨髓瘤細胞不含TK和HGPRT，故單個或融合骨髓瘤細胞將在HAT培養(yǎng)液中死亡。B淋巴細胞雖然有HGPRT和TK，但在體外培養(yǎng)條件下難以長期存活和增殖傳代。因此只有雜交瘤細胞才能在HAT培養(yǎng)液中生長繁殖。綜上所述，圖示用HAT培養(yǎng)液篩選出雜交瘤細胞的過程中，融合的淋巴細胞(B淋巴細胞)在HAT培養(yǎng)液中不生長的原因是缺乏在體外培養(yǎng)液中增殖的能力，融合的骨髓瘤細胞在HAT培養(yǎng)液中不生長的原因是其DNA合成途徑被氨基喋呤阻斷而不能進行DNA復(fù)制。