Question

（12分）下圖是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)干擾素的簡(jiǎn)化流程。請(qǐng)分析回答：

(1) 過(guò)程①使用的          酶能使特定部位的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的            （化學(xué)鍵）斷開(kāi)。運(yùn)載體的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端就可通過(guò)                            而結(jié)合。 過(guò)程②需要用到         酶，

(2圖中A的名稱是____________，它重組成功的物質(zhì)基礎(chǔ)是__________________ __________的結(jié)構(gòu)組成相同。

(3) A上應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)干擾素基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為　　　　。為直接檢測(cè)干擾素基因是否轉(zhuǎn)錄，可從細(xì)胞中提取　　　　__與用放射性同位素標(biāo)記的____________作探針進(jìn)行分子雜交，。

（4）利用PCR擴(kuò)增儀大量擴(kuò)增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據(jù)這一序列合成            ，除了該物質(zhì)和目的基因外，擴(kuò)增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和           酶，并適時(shí)調(diào)整溫度，才能使目的基因數(shù)量成指數(shù)式增長(zhǎng)。

（5）在該工程中所用的基因“剪刀”能識(shí)別的序列和切點(diǎn)是—G′GATCC—。

請(qǐng)畫(huà)出質(zhì)粒被切割形成黏性末端的過(guò)程圖

 

Answer 1

【答案】

(1)（同一種）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）  磷酸二酯鍵   堿基互補(bǔ)原則  DNA連接酶 

(2)重組載體(重組質(zhì)粒) 　干擾素基因的DNA與細(xì)菌質(zhì)粒DNA

（3）啟動(dòng)子   RNA   目的基因

（4）引物    DNA聚合酶（Taq酶）

（5）      —G′GATCC—               —G         GATCC—

—C  CTAGG—               —CCTAG         G—

【解析】（1）切割目的基因和質(zhì)粒需用同一種限制性核酸內(nèi)切酶。限制酶破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，目的基因與質(zhì)粒的黏性末端之間通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)連接起來(lái)，通過(guò)DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒。

（2）由于干擾素基因的DNA與細(xì)菌質(zhì)粒DNA結(jié)構(gòu)組成相同，所以可構(gòu)建重組質(zhì)粒。

（3）驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)是啟動(dòng)子。檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，可從細(xì)胞中提取RNA與用放射性同位素標(biāo)記的目的基因作探針進(jìn)行分子雜交。

（4）PCR的條件需有引物和耐高溫的DNA聚合酶，即Taq酶。

（5）黏性末端是兩條鏈。