Question

【題目】根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)�；卮鹣铝袉�(wèn)題。

（1）大腸桿菌質(zhì)粒常作為基因工程目的基因的載體，另外，__________和動(dòng)植物病毒也可作為載體，若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，而常用Ca2+處理大腸桿菌，其目的是___________________。

（2）利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)實(shí)現(xiàn)胰島素的批量生產(chǎn)是目前治療糖尿病的新思路，該過(guò)程中的關(guān)鍵操作環(huán)節(jié)是____________________________。

（3）對(duì)于胰島素基因的獲取，途徑之一是通過(guò)提取_____________細(xì)胞中的胰島素mRNA，經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄過(guò)程合成目的基因，之后通過(guò)_____________技術(shù)大量擴(kuò)增。

Answer 1

【答案】λ噬菌體的衍生物 提高受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率（或使之成為感受態(tài)細(xì)胞，有利于其吸收重組DNA分子） 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 胰島B PCR

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣，將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)是否插入目的基因可用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA可用分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)可用抗原-抗體雜交技術(shù)；個(gè)體水平上的鑒定有：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等；據(jù)此分析。

（1）基因工程常用的運(yùn)載體除了大腸桿菌質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒外，還有λ噬菌體的衍生物等；未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA）的能力極弱，因此常用Ca2+處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，有利于其吸收重組DNA分子。

（2）基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體。

（3） 胰島素基因只能在胰島B細(xì)胞中選擇性表達(dá)，因此應(yīng)該從胰島B細(xì)胞提取胰島素mRNA，經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄形成胰島素基因，再通過(guò)PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因。