【題目】癌細(xì)胞表面蛋白“PDL1”與T細(xì)胞表面蛋白“PD1”特異性結(jié)合后,可抑制T細(xì)胞活性并啟動其凋亡,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫“逃逸”。研究者對“PD1”基因進(jìn)行克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性鑒定,為制備抗體打基礎(chǔ)。研究中所用引物αβ堿基序列見圖1、幾種常用限制酶名稱及識別序列與酶切位點(diǎn)見圖2

1)首先提取細(xì)胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄生成_____作為模板:設(shè)計含有不同的限制酶切點(diǎn)的αβ序列為引物,通過_____技術(shù)擴(kuò)增目的基因。

2)選用圖1中的兩種名稱分別為_____的限制酶將“pIRES2EGFP質(zhì)!陛d體進(jìn)行雙切,再用DNA連接酶將其與目的基因拼接,構(gòu)建表達(dá)載體。該表達(dá)載體的組成,除了目的基因、標(biāo)記基因抗卡那霉素基因外,還必須具有_____

3)而后一定溫度下,與經(jīng)過Ca2+處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有_____培養(yǎng)基中,可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌,繼續(xù)培養(yǎng)該種大腸桿菌以擴(kuò)增重組DNA。

4)將擴(kuò)增后的“pIRES2EGFP載體/PD1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達(dá)外源基因的原代293T細(xì)胞。一段時間后,為確定PD1基因是否表達(dá),檢測細(xì)胞膜表面是否具有_____。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能,則可裂解293T細(xì)胞,提取該物質(zhì)看能否與_____發(fā)生結(jié)合,從而阻斷“PD1PDL1信號通路”。研究中還會有一步驟,只將“pIRES2EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,其目的是_____。

【答案】cDNA PCR XhoI、EoRI 啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn) 卡那霉素 PD1蛋白 PDL1或答ⅣD1抗體 作為對照

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟:

1)目的基因的獲取:方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟,基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。
3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞:根據(jù)受體細(xì)胞不同,導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
4)目的基因的檢測與鑒定:分子水平上的檢測:①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因DNA分子雜交技術(shù);②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA分子雜交技術(shù);③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

1)以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成cDNA;擴(kuò)增目的基因可采用PCR技術(shù)。
2)根據(jù)圖1中堿基序列和圖2中四種限制酶的識別序列可知,選用圖1中的兩種名稱分別為XhoIEoRI的限制酶將“pIRES2EGFP質(zhì)粒載體進(jìn)行雙切,再用DNA連接酶將其與目的基因拼接,構(gòu)建表達(dá)載體;虮磉_(dá)載體的組成包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)等。
3)根據(jù)第(2)題可知,標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因,因此培養(yǎng)基中需要加入卡那霉素。
4)將擴(kuò)增后的“pIRES2EGFP載體/PD1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達(dá)外源基因的原代293T細(xì)胞。一段時間后,為確定PD1基因是否表達(dá),檢測細(xì)胞膜表面是否具有PD1蛋白。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能,則可裂解293T細(xì)胞,提取該物質(zhì)看能否與PDL1發(fā)生結(jié)合,從而阻斷“PD1PDL1信號通路。研究中還會有一步驟,只將“pIRES2EGFP載體轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,其目的是作為對照。

練習(xí)冊系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】正常細(xì)胞內(nèi)K+濃度遠(yuǎn)高于細(xì)胞外,細(xì)胞外Na+濃度高于細(xì)胞內(nèi)。鈉鉀泵又稱鈉鉀ATP,它會使細(xì)胞外的Na+濃度高于細(xì)胞內(nèi),將細(xì)胞外的K+移入膜內(nèi)。以下說法錯誤的是

A.鈉鉀泵由附著在細(xì)胞膜上的核糖體合成

B.鈉鉀泵能維持神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)低Na+K+的環(huán)境,維持其靜息電位

C.鈉鉀泵具有物質(zhì)運(yùn)輸和催化功能

D.Na+K+進(jìn)出細(xì)胞與細(xì)胞膜的選擇透過性有關(guān)

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】下列是細(xì)胞中幾種細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)模式圖,相關(guān)敘述錯誤的是

A. ①中能夠合成一部分自身需要的蛋白質(zhì)

B. ②能對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,并運(yùn)送到細(xì)胞內(nèi)特定位置或細(xì)胞外

C. ③具有單層膜,其與性激素的合成有關(guān)

D. ④可以存在于動物細(xì)胞和髙等植物細(xì)胞中

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】將蠶豆(2n=12)根尖細(xì)胞中DNA分子雙鏈用3H標(biāo)記后移入普通培養(yǎng)液中培養(yǎng)。取不同細(xì) 胞周期的材料制作臨時裝片,檢測到的染色體形態(tài)有如下圖所示的三種。根據(jù)相關(guān)信息,下列 說法中錯誤的是

A. 若檢測到a染色體,說明該細(xì)胞已進(jìn)入第一個細(xì)胞周期

B. 第二次有絲分裂中期的染色體均為b類型

C. a、b兩種類型的染色體會出現(xiàn)在同一個細(xì)胞中

D. 第三次有絲分裂中期,某個細(xì)胞中可只出現(xiàn)c種染色體

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】地錢是一種苔蘚植物(圖 1),性染色體為 XY,其生活史有世代交替現(xiàn)象(圖 22n n 代表染色體數(shù)),會經(jīng)歷孢子體和配子體兩種不同的植物體形態(tài)。

1)地錢具有重要的藥用價值,若要快速人工繁育,可用的方法及原理是_________。

A.植物組織培養(yǎng)、植物細(xì)胞全能性 B.植物組織培養(yǎng)、植物細(xì)胞核全能性

C.植物體細(xì)胞雜交、植物細(xì)胞全能性 D.植物體細(xì)胞雜交、植物細(xì)胞核全能性

2)地錢的孢子體可以分為胞蒴、蒴柄、蒴足三部分,若比較這三部分結(jié)構(gòu)細(xì)胞中的核酸,分析合理的是_______

ADNA 完全相同,RNA 也完全相同 BDNA 完全相同,RNA 不完全相同

CDNA 不完全相同,RNA 完全相同 DDNA 不完全相同,RNA 也不完全相同

3)生理過程 III 共同維持地錢染色體數(shù)目的恒定,其中生理過程 I 稱為______;從受精卵到孢子體的發(fā)育過程所進(jìn)行的細(xì)胞分裂與生理過程II 相比,共同特征是__。

①需進(jìn)行DNA 復(fù)制 ②細(xì)胞分裂次數(shù)等于 DNA 復(fù)制次數(shù)

③可發(fā)生基因突變 ④可發(fā)生基因重組

A.①③ B.①④ C.②③ D.②④

4)齊齊哈爾大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院的科學(xué)家曾對中國東北地錢進(jìn)行了染色體核型分析,結(jié)果如圖所示,1~8均為常染色體,而X 代表性染色體。

染色體核型分析的取材應(yīng)選用_______(選填分裂旺盛的生長點(diǎn)不分裂的成熟組織);取材后的制片過程應(yīng)遵循正確的步驟,請完成排序:_____。(用數(shù)字編號表示)

①用清水漂洗 ②用拇指垂直向下壓片 ③用 0.2%龍膽紫溶液染色 ④用解離液解離

5)根據(jù)圖 2、圖 3分析,科學(xué)家在進(jìn)行此次染色體核型分析時,所用細(xì)胞取自_____(選填孢子體配子體),寫出你的判斷依據(jù):______。

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【題目】某實(shí)驗小組用小麥幼苗作為實(shí)驗材料,探究光照強(qiáng)度對光合作用速率的影響。將一定數(shù)量的小麥幼苗放在裝有培養(yǎng)液的密閉容器中,以白熾燈為光源,勻速緩慢移動光源,增大光源和容器之間的距離,測定容器中氧氣濃度隨時間的變化,實(shí)驗結(jié)果如圖。請回答下列問題:

(1)小麥幼苗葉肉細(xì)胞中氧氣產(chǎn)生的同時,生成的物質(zhì)有______________。

(2)根據(jù)圖示分析,小麥幼苗在_____點(diǎn)時積累的有機(jī)物達(dá)到最大值。在C點(diǎn)時,小麥幼苗進(jìn)行細(xì)胞呼吸消耗的氧氣的來源是________________。

(3)根據(jù)該實(shí)驗結(jié)果可知,隨著反應(yīng)時間的進(jìn)行容器中氧氣濃度的增加速率逐漸減小。同學(xué)甲由此得出了光照強(qiáng)度降低會使植物光合作用速率減弱的結(jié)論;同學(xué)乙認(rèn)為該實(shí)驗無法得出這一結(jié)論,同學(xué)乙作出這一判斷的理由是________________________。

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【題目】調(diào)查發(fā)現(xiàn)兩個家系都有單基因遺傳病甲和乙的患者,系譜圖如下(已知I3不攜帶乙病致病基因)。下列分析錯誤的是( )

A.甲病為常染色體隱性遺傳病

B.乙病致病基因位于X染色體上

C.II10的基因型有6種可能

D.II9II10生育一個女兒,該女兒患甲病的概率為l9

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】如圖由1分子磷酸、1分子堿基和1分子化合物a構(gòu)成化合物b,下列有關(guān)敘述正確的是

A.人體內(nèi)b5

B.m為尿嘧啶,則b為尿嘧啶脫氧核苷酸

C.ATP脫去兩個高能磷酸鍵,可形成ba為核糖

D.由四種b組成的多核苷酸鏈中A+G=C+T

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【題目】如圖,某種群自由交配,獲得F1,F1自由交配獲得F2,整個過程中沒有自然選擇以及基因突變等使基因頻率改變的因素,下列說法正確的是

種群

A.F1F2基因頻率不同B.F1F2基因型頻率不相同

C.整個過程沒有發(fā)生進(jìn)化D.F1F2純合子比例不同

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