Question

炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染�。畬�(duì)炭疽病疑似患者，可通過(guò)噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)確診．
細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落．
（1）采集疑似患者的樣本進(jìn)行分離培養(yǎng)時(shí)，需要制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基．下列有關(guān)操作方法正確的是

 

（多選）．
A．操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、熔解、倒平板、滅菌
B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯
C．待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)進(jìn)行倒平板
D．待平板冷卻凝固約5～10min后將平板倒過(guò)來(lái)放置
（2）通過(guò)平板劃線法獲得可疑菌落，圖1是平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)棰佗冖邰堍荩�下列操作方法正確的是

 

．
A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌
B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行
C．在⑤區(qū)域中才可以得到所需菌落
D．在①②③④⑤區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌
細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程如圖2所示．
（3）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)配制的液體培養(yǎng)基的滅菌具體要求是

 

．
（4）在實(shí)驗(yàn)Ⅳ中，先用無(wú)菌滴管吸取

 

滴于平板培養(yǎng)基表面，再用

 

涂勻，經(jīng)培養(yǎng)得到如圖中Ⅳ的6個(gè)菌落．然后在平板培養(yǎng)基的

 

（填數(shù)字標(biāo)號(hào)）菌落上滴加

 

．觀察并記錄結(jié)果．

Answer 1

考點(diǎn)：微生物的分離和培養(yǎng),測(cè)定某種微生物的數(shù)量

專題：

分析：用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分為制備培養(yǎng)基和純化大腸桿菌兩個(gè)階段進(jìn)行，其中制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．微生物接種的核心是防止雜菌的污染，保證培養(yǎng)物的純度．

解答： 解：（1）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱；
待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板；待平板冷卻凝固約5～10min后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使皿蓋在下，皿低在上；故選BCD．
（2）進(jìn)行平板劃線操作之前，用將接種環(huán)在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒滅菌；平板劃線操作應(yīng)在火焰旁進(jìn)行，不能在火焰上進(jìn)行；由題圖可知，5區(qū)域是第一區(qū)域，不可能在5區(qū)域獲得所需要的菌落，在最后一區(qū)域即1區(qū)域才有可能得到所需菌落；D、在1、2、3、4區(qū)域中劃線前都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌，保證每次劃線的菌種來(lái)自上一區(qū)域的末端，5區(qū)域劃線前都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌目的是防止雜菌污染，1區(qū)域劃線后進(jìn)行灼燒滅菌是防止污染環(huán)境及操作者；故選D．
（3）培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌，條件是壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30分鐘．
（4）由圖可知，實(shí)驗(yàn)Ⅳ的培養(yǎng)物來(lái)自實(shí)驗(yàn)Ⅲ，先用無(wú)菌滴管吸取 實(shí)驗(yàn)Ⅲ中的培養(yǎng)物滴于平板培養(yǎng)基表面，涂勻地采用無(wú)菌玻璃刮鏟．由題意可知，對(duì)炭疽病疑似患者，可通過(guò)噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)確，根據(jù)菌落的分布情況，所以對(duì)④⑤⑥或①②③的菌落滴加含噬菌體液體，觀察并記錄結(jié)果．
故答案為：
（1）BCD
（2）D
（3）壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30分鐘
（4）實(shí)驗(yàn)Ⅲ中的培養(yǎng)物   無(wú)菌玻璃刮鏟      ④⑤⑥或①②③含噬菌體液體

點(diǎn)評(píng)：本題考查微生物分離相關(guān)知識(shí)，綜合考查了微生物的分離、純化和培養(yǎng)等知識(shí)．