Question

【題目】某同學(xué)欲從土壤中篩選能夠分解纖維素的細(xì)菌，請回答以下問題：

（1）在篩選具有分解纖維素能力的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)將土壤樣品用____________________進(jìn)行稀釋，然后接種到以____________為唯一碳源的培養(yǎng)基上。

（2）采用____________法對初步篩選到的菌株進(jìn)行純化。

（3）對純化的菌種再采用____________方法進(jìn)行鑒定。

（4）若將稀釋105倍的上述纖維素分解菌菌液，用直接計(jì)數(shù)法和稀鐸涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

①直接計(jì)數(shù)法：用吸管吸取0.1ml該菌液，滴于血球計(jì)數(shù)板上的蓋玻片邊緣，待該細(xì)菌全部沉降到計(jì)數(shù)室底部，用顯微鏡直接計(jì)數(shù)，并計(jì)算出每升菌液的細(xì)菌數(shù)目。

②稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)：在五個(gè)固體培養(yǎng)基上分別接種O.lmL該細(xì)菌菌液，適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基上的菌落數(shù)分別為：40、152、154、156，則每升菌液中細(xì)菌數(shù)量為_________個(gè)。

③正常操作情況下，上述兩種計(jì)數(shù)法中，_________統(tǒng)計(jì)獲得的細(xì)菌數(shù)量數(shù)目目偏多，原因是_________。

Answer 1

【答案】 無菌水 纖維素 稀釋涂布平板法或平板劃線法 剛果紅染色法 1.26×1011 直接計(jì)數(shù)法 直接計(jì)數(shù)法無論菌休死活均被計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落

【解析】本題考查微生物的選擇培養(yǎng)、微生物計(jì)數(shù)等知識(shí)，要求考生掌握無菌操作技術(shù)，掌握篩選纖維素分解菌的方法，能利用直接計(jì)數(shù)法和稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物，并比較兩種計(jì)數(shù)法的差異。

（1）在篩選具有分解纖維素能力的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)將土壤樣品用無菌水進(jìn)行稀釋，以防止混入其他雜菌，然后接種到以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上。

（2）采用稀釋涂布平板法或平板劃線法都可以對初步篩選到的菌株進(jìn)行純化。

（3）對純化的菌種再采用剛果紅染色法方法進(jìn)行鑒定，若培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈，則說明透明圈中存在具有分解纖維素能力的細(xì)菌。

（4）若將稀釋105倍的上述纖維素分解菌菌液，用直接計(jì)數(shù)法和稀鐸涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)。①直接計(jì)數(shù)法：用吸管吸取0.1ml該菌液，滴于血球計(jì)數(shù)板上的蓋玻片邊緣，待該細(xì)菌全部沉降到計(jì)數(shù)室底部，用顯微鏡直接計(jì)數(shù)，并計(jì)算出每升菌液的細(xì)菌數(shù)目。②稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)：在五個(gè)固體培養(yǎng)基上分別接種O.lmL該細(xì)菌菌液，適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基上的菌落數(shù)分別為：40、152、154、156，故每升菌液中細(xì)菌數(shù)量為（40+152+154+156）40.1x1000x105=1.26x1011個(gè)。③正常操作情況下，上述兩種計(jì)數(shù)法中，直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)獲得的細(xì)菌數(shù)量數(shù)目目偏多，原因是直接計(jì)數(shù)法無論菌體死活均被計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。