Question

科學(xué)家從某些能無限增殖的細(xì)胞質(zhì)中分離出無限增殖的調(diào)控基因(prC)，該基因能激發(fā)許多動(dòng)物細(xì)胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更為廣闊的前景。請回答以下問題。

(1)利用細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體，促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞融合常用的誘導(dǎo)因素是________________。

(2)利用細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體時(shí)有兩次篩選，第1次篩選的目的是________________，第2次篩選的目的是_______ 。

(3)有人提出，可以直接通過基因工程導(dǎo)入該調(diào)控基因來制備單克隆抗體，其思路如圖所示。請回答：

①酶A是指________，酶B是指________。

②對已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的Ⅱ進(jìn)行“檢測”的目的是___________ ；題目中Ⅱ所指的細(xì)胞是________，Ⅲ所指的細(xì)胞具有的特點(diǎn)是__________ 。

③若將目的基因轉(zhuǎn)入胚胎干細(xì)胞中，胚胎干細(xì)胞也能夠發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，所依據(jù)的生物學(xué)原理是________。胚胎干細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下可以增殖而不發(fā)生________，但通過體外定向誘導(dǎo)，能培育出人造________________。

(4)也有人提出用細(xì)胞核移植技術(shù)構(gòu)建重組細(xì)胞來生產(chǎn)單克隆抗體，試用相關(guān)的圖示及文字表示該過程：

Answer 1

【解析】　(1)動(dòng)物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)有三種方法：物理方法(如電刺激，振動(dòng)等)；化學(xué)方法(如聚乙二醇)；生物方法(如滅活的病毒)。制備單克隆抗體，促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞融合常用的誘導(dǎo)因素是滅活的病毒。

(2)融合時(shí)可能出現(xiàn)4種情況，即：①未發(fā)生融合的細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞)；②自身融合細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞)；③多細(xì)胞融合(多個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合)；④雜交瘤細(xì)胞(單個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成)。在上述4種情況下，細(xì)胞中雜交瘤細(xì)胞是制備單克隆抗體所必需的，因此，用特定的選擇性培養(yǎng)基從不同類型的細(xì)胞中篩選出雜交瘤細(xì)胞即為第一次篩選。將某種抗原注入小鼠體內(nèi)后，產(chǎn)生的效應(yīng)B細(xì)胞就會(huì)有多種，經(jīng)過融合后第一次篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞也就有多種，必須從中篩選出能產(chǎn)生人們所需抗體的特定的雜交瘤細(xì)胞，此為第二次篩選。

(3)①讀圖知酶A將目的基因及質(zhì)粒進(jìn)行了切割即是指限制酶，酶B是表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)需要的DNA連接酶。

②對導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞進(jìn)行檢測的目的在于導(dǎo)入的目的基因是否能在受體細(xì)胞中表達(dá)。因此此工程技術(shù)制備的是單克隆抗體，所以受體細(xì)胞應(yīng)該是漿細(xì)胞。Ⅲ所指的細(xì)胞既可大量增殖又能產(chǎn)生特異性抗體。

③胚胎干細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)生了細(xì)胞的分裂、分化最終形成一個(gè)完整的生物體，依據(jù)的原理是細(xì)胞的全能性；胚胎干細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)通過控制條件可只分裂而不分化。

(4)細(xì)胞核移植技術(shù)構(gòu)建重組細(xì)胞來生產(chǎn)單克隆抗體時(shí)，應(yīng)將可發(fā)生大量增殖的細(xì)胞(如骨髓瘤細(xì)胞)的細(xì)胞核去除后利用其細(xì)胞質(zhì)，與被特定抗原刺激后產(chǎn)生的漿細(xì)胞的細(xì)胞核發(fā)生融合重組后，再進(jìn)行體外培養(yǎng)。

【答案】　(1)滅活的病毒　(2)篩選出雜交瘤細(xì)胞　篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞　(3)①限制(性核酸內(nèi)切)酶　DNA連接酶

②檢測目的基因在受體細(xì)胞中是否進(jìn)行了表達(dá)(或檢測受體細(xì)胞是否顯示出目的基因控制的性狀)　漿細(xì)胞　既能大量增殖又能產(chǎn)生特定抗體

③細(xì)胞的全能性　分化　器官和組織

(4)如圖