Question

【題目】白細胞介素是一類淋巴因子。研究人員將人白細胞介素的基因導入到酵母細胞中，使其分泌出有活性的白細胞介素。

（1）為增加白細胞介素基因的數(shù)量，可使用_____________________技術，但前提是必須知道基因的已知序列，目的是__________________________________________。

（2）在重組載體導入酵母菌細胞之前，需用_____________________處理酵母菌，白細胞介素基因進入酵母菌細胞內，并且在其細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程，稱為_____________________。在表達過程中，啟動子需與_____________________識別和結合，從而驅動轉錄過程。

（3）在體液免疫過程中，白細胞介素是由_____________________細胞分泌的，為了能成功表達出白細胞介素，不使用細菌，而使用酵母細胞作為受體細胞，可能原因是_____________________。

（4）在分泌型表達載體和白細胞介素基因所在的DNA分子上均有多個限制酶的酶切位點，圖示過程獲得有效表達的重組栽體使用了EcoRl和EcoR52兩種限制酶，比使用單一的限制酶，其優(yōu)點是__________________________________________。

Answer 1

【答案】PCR 設計引物 Ca2+ 轉化 RNA聚合酶 T淋巴 細菌細胞中無內質網(wǎng)和高爾基體等加工白細胞介素的細胞器 防止目的基因、表達載體發(fā)生自身環(huán)化或者防止目的基因反向接入到分泌型表達載體中

【解析】

分析題圖，圖示表示基因表達載體的構建過程，載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的切割位點，所以切割載體和目的基因時用限制酶EcoRⅠ與EcoR52，再用DNA連接酶連接目的基因和運載體形成重組載體。

（1）基因工程中，擴增目的基因的方法為PCR技術，但前提是必須知道基因的已知序列，以便設計引物。

（2）在重組載體導入酵母菌細胞之前，需用Ca2+處理酵母菌，使酵母菌稱為感受態(tài)細胞，白細胞介素基因進入酵母菌細胞內，并且在其細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程，稱為轉化．在表達過程中，啟動子需與RNA聚合酶識別和結合，從而驅動轉錄過程。

（3）在體液免疫過程中，白細胞介素是由T淋巴細胞分泌的；由于細菌屬于原核生物，細胞中無內質網(wǎng)和高爾基體等加工白細胞介素的細胞器，因此為了能成功表達出白細胞介素，不使用細菌，而使用酵母細胞作為受體細胞。

（4）在分泌型表達載體和白細胞介素基因所在的DNA分子上均有多個限制酶的酶切位點，圖示過程獲得有效表達的重組栽體使用了EcoRl和EcoR52兩種限制酶，比使用單一的限制酶，其優(yōu)點是防止目的基因、表達載體發(fā)生自身環(huán)化或者防止目的基因反向接入到分泌型表達載體中。