Question

7．如圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的過程．圖中tet^R表示四環(huán)素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)．據(jù)圖回答：

（1）為確保目的基因的完整性及與載體連接的方向性，需用HindⅢ和BamHⅠ（填酶的名稱）限制酶同時切割載體和人乳鐵蛋白基因，欲篩選出含有重組載體的大腸桿菌，需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行，能驅(qū)動人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控因子是圖中的啟動子．
（2）過程①采用的操作方法通常是顯微注射技術(shù)，過程②代表的生物技術(shù)是胚胎移植．對早期胚胎進(jìn)行切割，經(jīng)過程②可獲得多個新個體，但胚胎發(fā)育到囊胚時，要確保內(nèi)細(xì)胞團(tuán)平均分割．
（3）為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)，對代孕牛的要求是同種、生理狀況相同、健康體質(zhì)和正常繁殖能力等．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線，包括基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞；過程②需采用胚胎移植技術(shù)．

解答 解：（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點(diǎn)，其中限制酶SmaI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，所以獲取目的基因和構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質(zhì)粒后，會破壞質(zhì)粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行．啟動子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列．
（2）過程①是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，當(dāng)受體細(xì)胞是動物細(xì)胞時，將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法．過程②代表胚胎移植．對早期胚胎進(jìn)行切割，經(jīng)過程②可獲得多個新個體，但胚胎發(fā)育到囊胚時，要確保內(nèi)細(xì)胞團(tuán)平均分割．
（3）為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)，對代孕牛的要求是同種、生理狀況相同、健康體質(zhì)和正常繁殖能力等．
故答案為：
（1）HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素     啟動子
（2）顯微注射技術(shù)      胚胎移植     內(nèi)細(xì)胞團(tuán)
（3）抗原-抗體雜交      同種、生理狀況相同、健康體質(zhì)和正常繁殖能力等

點(diǎn)評 本題結(jié)合乳腺生物反應(yīng)器培育過程圖，考查基因工程、胚胎工程等知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱或采用的技術(shù)；識記胚胎分割技術(shù)的理論基礎(chǔ)，能提取圖中有效信息答題．