Question

【題目】研究發(fā)現(xiàn)HOXA7基因表達(dá)的蛋白質(zhì)具有DNA結(jié)合及轉(zhuǎn)錄因子活性， 調(diào)控胚胎及成體細(xì)胞增殖、分化�？蒲腥藛T對(duì)研究HOXA7基因在宮頸癌中的功能作用做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答問(wèn)題：

（1）癌細(xì)胞具有無(wú)限___________的特點(diǎn)，宮頸癌發(fā)生的根本原因是___________。

（2）利用_____酶分別對(duì)HOXA7基因干擾序列—si-HOXA7（可以與HOXA7的mRNA發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)）和載體（plent-U6-GFP）進(jìn)行切割，并用___________酶連接，構(gòu)建表達(dá)載體plent-U6-GFP/si-HOXA7， 并以空載體plent-U6- GFP（NC)為對(duì)照。將重組質(zhì)粒plent-U6-GFP/si-HOXA7和對(duì)照質(zhì)粒plent-U6-GFP用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染宮頸癌Siha細(xì)胞，獲得實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞（Siha/si-HOXA7）和對(duì)照組細(xì)胞（Siha/NC）。分別采用RT-PCR法和抗原—抗體雜交檢測(cè)獲得細(xì)胞中的HOXA7 mRNA（圖1A）和HOXA7蛋白質(zhì)（圖1B）水平，結(jié)果如圖1。

注：GAPDH和β-actin在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，作為參照物。

與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組HOXA7基因表達(dá)的mRNA和蛋白質(zhì)______________，說(shuō)明_________（成功/未成功）建立可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的Siha/si-HOXA7細(xì)胞系。

（3）為進(jìn)一步研究HOXA7對(duì)宮頸癌細(xì)胞體外增殖能力的影響， 取實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞Siha/si-HOXA7和對(duì)照組細(xì)胞Siha/NC培養(yǎng)， 檢測(cè)細(xì)胞的平板克隆形成能力，結(jié)果如圖2（A）；利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的細(xì)胞周期，結(jié)果如圖2（B）。

由圖2（A）結(jié)果可知，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞Siha/si-HOXA7_________，由此可以推測(cè)HOXA7基因能夠________（促進(jìn)或抑制）宮頸癌細(xì)胞體外增殖；結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果，推測(cè)HOXA7對(duì)人宮頸癌細(xì)胞的作用機(jī)制是______________。

Answer 1

【答案】分裂（增殖） 原癌基因或抑癌基因突變 限制性內(nèi)切（限制） DNA連接 均明顯低于對(duì)照組 成功 克隆形成能力明顯減弱（增殖能力減弱/細(xì)胞周期阻滯 ）繼而導(dǎo)致細(xì)胞增殖能力降低 促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞體外增殖 G1期細(xì)胞增多， S期細(xì)胞減少

【解析】

據(jù)圖分析，圖1中A、B兩圖顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞（Siha/si-HOXA7）的HOXA7表達(dá)產(chǎn)生的mRNA和蛋白質(zhì)都比對(duì)照組少；圖2A圖顯示，培養(yǎng)皿中實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞（Siha/si-HOXA7）數(shù)量明顯少于對(duì)照組，說(shuō)明HOXA7基因能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞體外增殖。

（1）細(xì)胞癌變的根本原因是原癌基因或抑癌基因突變，癌細(xì)胞具有無(wú)限增殖等特點(diǎn)。

（2）切割基因和質(zhì)粒應(yīng)該用限制酶，連接切割后的質(zhì)粒和目的基因應(yīng)該用DNA連接酶；據(jù)圖1分析，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組HOXA7基因表達(dá)的產(chǎn)生的mRNA和蛋白質(zhì)含量都明顯減少了，說(shuō)明成功建立可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的Siha/si-HOXA7細(xì)胞系。

（3）據(jù)圖2分析，A圖顯示右圖培養(yǎng)皿中細(xì)胞數(shù)量明顯少于左圖培養(yǎng)皿，即實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞Siha/si-HOXA7克隆形成能力明顯減弱（增殖能力減弱/細(xì)胞周期阻滯 ）繼而導(dǎo)致細(xì)胞增殖能力降低，結(jié)合以上分析可以推測(cè)HOXA7基因能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞體外增殖；結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果，推測(cè)HOXA7對(duì)人宮頸癌細(xì)胞的作用機(jī)制是G1期細(xì)胞增多， S期細(xì)胞減少。