Question

11．人的血清白蛋白（HSA）在臨床上需求量很大，通常從人血中提取．但由于艾滋病病毒等人類感染性病原體造成的威脅與日俱增，使人們對血液制品顧慮重重．如果應用基因工程將人的血清白蛋白基因轉入奶牛細胞中，那么利用牛的乳腺細胞生產血清白蛋白就成為可能．下圖表示利用乳腺生物反應器生產人血清白蛋白的過程，圖中Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識別序列及切割位點如表所示，請回答以下問題：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識別序列及切割位點

（1）構建基因表達載體時，需要將人血清白蛋白基因嵌入到啟動子和終止子之間，這樣人血清白蛋白基因就能在乳腺細胞中表達．
（2）要將人血清白蛋白基因插入質粒中，若只允許使用一種限制酶，那么應選擇的限制酶是Sau3AⅠ．
（3）據圖分析，篩選含有重組質粒的受體細胞首先需要在含氨芐青霉素（填“四環(huán)素”或“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐青霉素”）的培基上進行，原因是用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會破壞Amp^r基因，導入重組質粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來．
（4）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為，對于該部位，這兩種酶都不能（“都不能”或“只有一種能”）切開．
（5）為了獲得母奶牛，胚胎移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．若要檢測牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示利用乳腺生物反應器生產人血清白蛋白的過程，其中①表示將目的基因導入受體細胞的過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示胚胎移植過程；④表示妊娠形成轉基因牛；⑤表示從轉基因牛的乳汁中獲取人血清白蛋白．

解答 解：（1）啟動子啟動轉錄過程，終止子終止轉錄過程，因此構建基因表達載體時，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動子和終止子之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細胞中表達．
（2）根據表中五種酶的識別序列及切割位點可知，限制酶Sau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應選擇限制酶Sau3AI．
（3）據用限制酶Sau3AI切割后會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此倒入重組質粒的受體細胞可能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來．
（4）根據表格中各種限制酶的識別序列和切割位點可知，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，這兩種酶都不能切開．
（5）為了獲得母奶牛，胚胎移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．檢測目的基因是否表達產生相應的蛋白質可采用抗原-抗體雜交技術．
故答案為：
（1）啟動子和終止子  
（2）Sau3AⅠ
（3）氨芐青霉素     用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會破壞Amp^r基因，導入重組質粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來
（4）    都不能
（5）性別鑒定      抗原-抗體雜交

點評 本題結合圖表，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的操作工具及其特點；識記基因工程的操作步驟，掌握其應用，能根據圖中和表中信息選擇合適的限制酶，再結合所學的知識準確答題．