Question

【題目】如圖是基因文庫的構(gòu)建示意圖。請回答下列問題。

（1）獲取目的基因時，如果目的基因的_________是未知的，可以建立一個包括目的基因在內(nèi)的基因文庫，再從基因文庫中獲得目的基因。對于高等動植物復(fù)雜的染色體DNA來說，單個基因所占比例極小，將其分離出來并非易事，一般需要先對DNA進行_________。以產(chǎn)生足夠多的數(shù)量。

（2）如圖所示基因文庫用克隆載體構(gòu)建，載體中目的基因可通過細菌的___________完成片段的克隆。從基因文庫中分離目的基因時主要利用核酸探針，核酸探針在基因工程的操作過程中還有很多方面的應(yīng)用，如：檢測目的基因是否導(dǎo)入到受體細胞，以及_________。

（3）培育轉(zhuǎn)基因羊時，可利用顯微注射法將基因文庫中獲得的目的基因?qū)��?/span>_____（受體）細胞，再經(jīng)過___________后，移植到___________的發(fā)情母畜的輸卵管或子宮角。目的基因在受體細胞中的整合率不太穩(wěn)定，這除了與注射的位置和時間有關(guān)外，還要考慮目的基因的構(gòu)型和__________。

Answer 1

【答案】核苷酸序列 擴增 繁殖 ①檢測目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA中；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA外（答對1點即可） 受精卵 胚胎體外培養(yǎng) 未經(jīng)配種 濃度

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）目的基因的獲取方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成法。如果目的基因的核苷酸序列未知，可以構(gòu)建基因文庫，從基因文庫中獲取目的基因。要產(chǎn)生足夠多的DNA片段可以采取PCR擴增技術(shù)。

（2）構(gòu)建基因文庫的過程中，基因表達載體中目的基因可通過細菌的繁殖完成片段的克隆。核酸探針在基因工程的操作過程中可以用于目的基因的檢測和鑒定，如檢測目的基因是否導(dǎo)入到受體細胞，以及檢測目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA中；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。

（3）將目的基因?qū)�入動物細胞時一般選擇動物的受精卵細胞作為受體，再經(jīng)過早期體外胚胎培養(yǎng)后，移植到未經(jīng)配種的發(fā)情母畜的輸卵管或子宮角。目的基因在受體細胞中的整合率注射的位置和時間有關(guān)，除外還要考慮目的基因的構(gòu)型和濃度的影響。