Question

【題目】泡菜腌制過程中硝酸還原菌能產(chǎn)生亞硝酸鹽，而一些乳酸菌合成的亞硝酸鹽還原酶，能夠顯著降低泡菜中亞硝酸鹽的含量。研究小組從傳統(tǒng)工藝制作的泡菜壇中取樣，篩選亞硝酸鹽還原酶高產(chǎn)乳酸菌菌株，實驗過程如下。請回答下列問題：

（1）實驗中需制備泡菜樣品處理液，制備過程中使用氫氧化鋁乳液的目的是__________。

（2）將處理過的泡菜發(fā)酵液稀釋后涂布在含溴甲酚綠（遇酸變色）的__________（填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基上，__________（填“需氧”或“厭氧”）培養(yǎng)一段時間后，挑取周圍變色的________在________上臨時保存。

（3）再將臨時保藏的各菌種分別接種到含________的液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間。培養(yǎng)液離心后取上清液，在鹽酸酸化條件下依次加入對氨基苯磺酸、N-1 -萘基乙二胺鹽酸鹽試劑，形成________色染料，選出顯色最________（填“深”或“淺”）的菌落即為亞硝酸鹽還原酶高產(chǎn)乳酸菌菌株。

（4）取樣的各泡菜壇中亞硝酸鹽含量存在差異，可能的原因是________（答出2點）。

Answer 1

【答案】吸附樣品濾液中的雜質(zhì)，使濾液變得無色透明，便于觀察顏色變化 鑒別 厭氧 單個菌落 固體斜面培養(yǎng)基 亞硝酸鹽 玫瑰紅 淺 各壇中微生物種類和數(shù)量、蔬菜的種類、蔬菜的新鮮程度、鹽的加入量等可能存在差異

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物，如伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、泡菜的制作及亞硝酸鹽含量的測定：

（1）泡菜的制作原理：泡菜的制作離不開乳酸菌。在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。

（2）測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標準液進行目測對比，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量。

（1）實驗中需制備泡菜樣品處理液，制備過程中使用氫氧化鋁乳液的目的是吸附樣品濾液中的雜質(zhì)，使濾液變得無色透明，便于觀察顏色變化。

（2）將處理過的泡菜發(fā)酵液稀釋后涂布在含溴甲酚綠（遇酸變色）的鑒別培養(yǎng)基上，由于乳酸菌為厭氧型，所以需要厭氧培養(yǎng)一段時間后，挑取周圍變色的單個菌落在固體斜面培養(yǎng)基上臨時保存。

（3）一些乳酸菌合成的亞硝酸鹽還原酶，能夠顯著降低泡菜中亞硝酸鹽的含量，所以需要再將臨時保藏的各菌種分別接種到含亞硝酸鹽的液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間。培養(yǎng)液離心后取上清液，在鹽酸酸化條件下依次加入對氨基苯磺酸、N-1 -萘基乙二胺鹽酸鹽試劑，形成玫瑰紅色染料，由于亞硝酸鹽還原酶高產(chǎn)乳酸菌菌株能將周圍的亞硝酸鹽大量分解，使玫瑰紅顏色變淺，故選出顯色最淺的菌落即為亞硝酸鹽還原酶高產(chǎn)乳酸菌菌株。

（4）由于各壇中微生物種類和數(shù)量、蔬菜的種類、蔬菜的新鮮程度、鹽的加入量等可能存在差異，所以取樣的各泡菜壇中亞硝酸鹽含量存在差異。