Question

【題目】北極比目魚中有抗凍基因，下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖，請(qǐng)回答：

（1）利用過(guò)程①的方法構(gòu)建的基因文庫(kù)是____________（填“基因組文庫(kù)”或“部分基因文庫(kù)”）。

（2）過(guò)程②中常需要使用限制酶和DNA連接酶，既能連接黏性末端又能連接平末端的DNA連接酶是_________________________。

（3）為使過(guò)程①獲取的目的基因在番茄細(xì)胞中能夠表達(dá)，在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，需在目的基因的兩端加入________________________。

（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，并通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，可以將目的基因?qū)�入番茄體細(xì)胞中染色體的DNA上，其原理是__________________________________________。

（5）要確認(rèn)抗凍基因是否在轉(zhuǎn)基因番茄植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因番茄植株中該基因的_______________是否呈陽(yáng)性。

Answer 1

【答案】 部分基因文庫(kù) T4DNA連接酶 啟動(dòng)子、終止子 目的基因隨農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體DNA上 表達(dá)產(chǎn)物

【解析】本題考查基因工程,解題要點(diǎn)是識(shí)記基因工程的操作工具及基本操作程序

(1)用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段，是部分基因文庫(kù)

(2) 既能連接黏性末端又能連接平末端的DNA連接酶是T4DNA連接酶

(3)一個(gè)基因表達(dá)載體的組成,除了目的基因外,還必須有啟動(dòng)子和終止子.

(4)因?yàn)檗r(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上,如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒上,通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用,就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞,并將其整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上,使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá).

(5)檢測(cè)目的基因是否表達(dá),可從轉(zhuǎn)基因生物中提取基因的表達(dá)產(chǎn)物即蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交,若呈陽(yáng)性,表明目的基因已成功表達(dá).

[點(diǎn)睛]:本題易混點(diǎn):1.關(guān)于基因文庫(kù):包含某生物所有基因的叫該生物的基因組文庫(kù),用mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA片段是部分基因文庫(kù);2.關(guān)于基因表達(dá)載體:一個(gè)基因表達(dá)載體應(yīng)包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因;3.目的基因的檢測(cè)與鑒定中,可以利用DNA分子雜交技術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體上的DNA是否插入了目的基因,以及目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,而檢測(cè)目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì),可用抗原-抗體雜交,若有雜交帶,表明目的基因已成功表達(dá)出蛋白質(zhì).