Question

（12分）科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下圖一是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖，圖二為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。魚的抗凍蛋白基因不含圖中限制酶識別序列，Ampr為抗氨芐青霉素基因，其中①—④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（1）獲取魚的抗凍蛋白基因途徑主要有 。為了在番茄中獲得抗凍蛋白必須將抗凍蛋白基因連接在質(zhì)粒中的 之后 。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的 過程。

（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。該酶的特點(diǎn) 。在此實(shí)例中，應(yīng)該選用限制酶 切割。

（3）要利用培養(yǎng)基篩選出已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有 作為標(biāo)記基因。

（4）研究人員通常采用 法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用 技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

Answer 1

（1）從體細(xì)胞中分離和化學(xué)方法人工合成 啟動子 脫分化、再分化

（2）識別特定的DNA序列并在特定位點(diǎn)切割 NdeⅠ、BamHⅠ

（3）抗氨芐青霉素基因(Ampr)

（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化(或基因槍法等) 抗原-抗體

【解析】

試題分析：

（1）獲取目的基因的主要途徑有從體細(xì)胞中分離和化學(xué)方法人工合成；構(gòu)建基因表達(dá)載體時，必須將目的基因插入啟動子之后；分析題圖可知，圖中③為脫分化過程，形成愈傷組織，④為再分化過程，形成胚狀體。

（2）限制酶的作用特點(diǎn)是能識別特定的DNA序列并在特定位點(diǎn)切割DNA分子；分析題圖可知，啟動子和終止子之間有三個限制酶位點(diǎn)：NdeⅠ、Xba I和BamHⅠ，其中質(zhì)粒中Xba I的酶切位點(diǎn)有兩個，會把終止子切掉，因此不能用Xba I進(jìn)行切割，而NdeⅠ、BamHⅠ的位點(diǎn)都只有一個，因此最好用NdeⅠ、BamHⅠ兩種限制酶進(jìn)行切割，可以防止目的基因插入時出現(xiàn)反向連接。

（3）分析題圖，圖中Ampr為抗氨芐青霉素基因，為標(biāo)記基因，可以用于目的基因的檢測與鑒定。

（4）把目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法最常用的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)的方法是抗原-抗體雜交技術(shù)。

考點(diǎn)：本題考查基因工程的有關(guān)知識，意在考查考生識記能力、識圖能力和理解所學(xué)知識的要點(diǎn)，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識與觀點(diǎn)，通過比較、分析與綜合等方法對某些生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論。