Question

【題目】下圖為獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米的技術路線，請回答：

（1）構建表達載體選擇限制性核酸內(nèi)切酶時，要求Ti質(zhì)粒內(nèi)每種限制性核酸內(nèi)切酶只有一個切割位點，同時要求酶切后，G基因形成的兩個粘性末端序列不相同，這個過程需用______種限制酶，目的是___________。除草劑抗性基因G和Ti質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是________________________

（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時，T-DNA攜帶_______________插入受體細胞的核DNA。若核DNA中僅插入一個G基因，自交后代含G基因的植株中，純合子占________________。

（3）獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米涉及到多次篩選，其中篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌應使用含_______________的選擇培養(yǎng)基，使用含_______________的選擇培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)化的愈傷組織，再誘導愈傷組織再生出抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米。

Answer 1

【答案】2 防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化 磷酸二酯鍵 抗除草劑基因G 1/3 抗生素 除草劑

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)-抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）在構建基因表達載體時，為了防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，需要使用2種不同的限制酶對目的基因（除草劑抗性基因G）和質(zhì)粒進行切割；DNA連接酶催化形成的化學鍵是磷酸二酯鍵。

（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時，T-DNA攜帶目的基因（除草劑抗性基因G）插入受體細胞的核DNA；若核DNA中僅插入一個G基因，則轉(zhuǎn)基因植株相當于雜合子，其自交后代含G基因的植株中，純合子占1/3。

（3）據(jù)圖分析，圖示質(zhì)粒上的標記基因是抗生素抗性基因，因此篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌應使用含抗生素的選擇培養(yǎng)基；應該使用含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)化的愈傷組織，再誘導愈傷組織再生出抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米。