Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答與泡菜制作有關(guān)的問(wèn)題：

(1)為了獲得用于泡菜腌制的優(yōu)良乳酸菌，通常將泡菜汁稀釋后涂布在MRS乳酸菌專(zhuān)用培養(yǎng)基上進(jìn)行________分離，然后將其擴(kuò)大培養(yǎng)，并進(jìn)行特性鑒定。在進(jìn)行特性鑒定時(shí)，必需進(jìn)行耐酸實(shí)驗(yàn)、耐高溫實(shí)驗(yàn)和________實(shí)驗(yàn)等，從而選出優(yōu)勢(shì)菌株。下圖是四個(gè)菌株在白菜汁培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線，比較適合泡菜腌制的菌株是________。

(2)在泡菜腌制過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生有機(jī)酸、醇類(lèi)、亞硝酸鹽等。腌制初期大量繁殖的微生物是________，醇類(lèi)主要是由它進(jìn)行________產(chǎn)生的，隨后泡菜中PH開(kāi)始下降，其它微生物生長(zhǎng)受到抑制。

(3)為測(cè)定腌制的泡菜中亞硝酸鹽含量，取腌制的泡菜和少量泡菜湯，在勻漿機(jī)中打成勻漿，過(guò)濾洗滌得到樣品溶液，先除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等，然后與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與________偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物，然后用光程1cm的比色杯測(cè)定光密度值。如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的比色杯光程大于樣液的比色杯光程，測(cè)得的樣液中亞硝酸鹽含量________（偏大、偏小、無(wú)影響）。

（二）草甘膦是一種常用非選擇性除草劑，一種農(nóng)桿菌中的基因E編碼抗草甘膦的酶，利用基因工程技術(shù)將基因E轉(zhuǎn)入大豆中，以提高大豆對(duì)草甘膦的忍耐能力，請(qǐng)回答：

(1)從農(nóng)桿菌中提取含有基因E的DNA，用限制性核酸內(nèi)切酶分別切割含基因E的DNA和農(nóng)桿菌的________，然后用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子并導(dǎo)入農(nóng)桿菌。為了提高重組DNA形成的效率，除了考慮目的基因和載體的質(zhì)量與濃度外，還需要考慮的主要因素有________。

(2)將________后的大豆胚尖浸泡在含有E基因的農(nóng)桿菌溶液中，一段時(shí)間后取出并轉(zhuǎn)移到加有適當(dāng)配比生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上，脫分化形成愈傷組織，為提高形成愈傷組織能力，可以對(duì)大豆胚尖進(jìn)行適當(dāng)?shù)?/span>________刺激處理。

(3)除了用(2)中方法得到轉(zhuǎn)基因大豆外，也可以將上述愈傷組織進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)，分散成________豐富、液泡小而細(xì)胞核大的單細(xì)胞，這種單細(xì)胞依次經(jīng)細(xì)胞團(tuán)、球形胚、心形胚和________，最后再生出完整的植株。

(4)為判斷本研究是否達(dá)到預(yù)期目的，可比較轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆的________性狀。

Answer 1

【答案】單菌落 耐鹽 D 假絲酵母菌 厭氧呼吸 N-1-萘基乙二胺 偏小 Ti質(zhì)粒 粘性末端的情況、DNA連接酶活性 消毒 創(chuàng)傷 細(xì)胞質(zhì) 胚狀體 耐草甘膦

【解析】

（一）1、泡菜制作的原理是乳酸菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸，為了防止微生物污染，制作泡菜過(guò)程中應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌操作；泡菜鹽水的濃度應(yīng)該是清水與鹽的比例應(yīng)為4：1，如果鹽濃度過(guò)高會(huì)抑制乳酸菌發(fā)酵，造成咸而不酸，鹽濃度過(guò)低不足以抑制微生物生長(zhǎng)，造成雜菌污染；為了縮短制作時(shí)間可以加入陳泡菜水，以增加乳酸菌數(shù)量；微生物培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基至少包括碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等。

2、測(cè)定亞硝酸鹽含量時(shí)亞硝酸鹽在鹽酸酸化的條件下與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，與N﹣1﹣萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，用比色法可以推測(cè)樣品中的亞硝酸鹽的含量。

（二）1、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T﹣DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上。

2、植物組織培養(yǎng)就是在無(wú)菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。

（一）（1）為了獲得用于泡菜腌制的優(yōu)良乳酸菌，通常將泡菜汁稀釋后涂布在MRS乳酸菌專(zhuān)用培養(yǎng)基上進(jìn)行單菌落分離，然后將其擴(kuò)大培養(yǎng)，并進(jìn)行特性鑒定。在進(jìn)行特性鑒定時(shí)，必需進(jìn)行耐酸實(shí)驗(yàn)、耐高溫實(shí)驗(yàn)和耐鹽實(shí)驗(yàn)等，從而選出優(yōu)勢(shì)菌株。由曲線可知D前期數(shù)量較多，后期下降較快，所以適合泡菜腌制。

（2）在泡菜腌制過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生有機(jī)酸、醇類(lèi)、亞硝酸鹽等。腌制初期大量繁殖的微生物是假絲酵母菌，醇類(lèi)主要是由它進(jìn)行厭氧呼吸產(chǎn)生的，隨后泡菜中PH開(kāi)始下降，其它微生物生長(zhǎng)受到抑制。

（3）為測(cè)定腌制的泡菜中亞硝酸鹽含量，取腌制的泡菜和少量泡菜湯，在勻漿機(jī)中打成勻漿，過(guò)濾洗滌得到樣品溶液，先除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等，然后與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與N﹣1﹣萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物，然后用光程1cm的比色杯測(cè)定光密度值。如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的比色杯光程大于樣液的比色杯光程，測(cè)得的樣液中亞硝酸鹽含量偏小。

（二）

（1）農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，從農(nóng)桿菌中提取含有基因E的DNA，用限制性核酸內(nèi)切酶分別切割含基因E的DNA和農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，然后用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子并導(dǎo)入農(nóng)桿菌。為了提高重組DNA形成的效率，除了考慮目的基因和載體的質(zhì)量與濃度外，還需要考慮的主要因素有黏性末端的情況、DNA連接酶活性。

（2）將消毒后的大豆胚尖浸泡在含有E基因的農(nóng)桿菌溶液中，一段時(shí)間后取出并轉(zhuǎn)移到加有適當(dāng)配比生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上，脫分化形成愈傷組織，為提高形成愈傷組織能力，可以對(duì)大豆胚尖進(jìn)行適當(dāng)?shù)膭?chuàng)傷刺激處理。

（3）除了用（2）中方法得到轉(zhuǎn)基因大豆外，也可以將上述愈傷組織進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)，分散成單細(xì)胞，這種單細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大；這種單細(xì)胞依次經(jīng)細(xì)胞團(tuán)、球形胚、心形胚和胚狀體，最后再生出完整的植株。

（4）該研究的目的是提高大豆對(duì)草甘膦的忍耐能力，因此為判斷本研究是否達(dá)到預(yù)期目的，可比較轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆的耐草甘膦性狀。