（15分）基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來的一門新興技術(shù)�！盎�因敲除細胞”構(gòu)建過程如下：
第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細胞（ES），在培養(yǎng)基中擴增。這些細胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。
第二步：構(gòu)建基因表達載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對，所以能像“準星”一樣，將表達載體準確地帶到靶基因的位置。
第三步：將表達載體導入胚胎干細胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細胞的基因改造。
第四步：基因改造后的胚胎干細胞增殖、篩選。
請根據(jù)上述資料，回答下列問題：
（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)�入受體細胞前，應(yīng)首先完成                。
（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細胞通常是            ；若用大腸桿菌儲存目的基因，則需先將其處理為            細胞。
（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是            。
（4）獲得的小鼠，通過有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因            。

（15分）基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來的一門新興技術(shù)�！盎�因敲除細胞”構(gòu)建過程如下：

第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細胞（ES），在培養(yǎng)基中擴增。這些細胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。

第二步：構(gòu)建基因表達載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對，所以能像“準星”一樣， 將表達載體準確地帶到靶基因的位置。

第三步：將表達載體導入胚胎干細胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干細胞增殖、篩選。

請根據(jù)上述資料，回答下列問題：

（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)�入受體細胞前，應(yīng)首先完成                 。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細胞通常是             ；若用大腸桿菌儲存目的基因，則需先將其處理為             細胞。

（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是             。

（4）獲得的小鼠，通過有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因             。

基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來的一門新興技術(shù)�！盎�因敲除細胞”構(gòu)建過程如下：

第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細胞（ES），在培養(yǎng)基中擴增。這些細胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。

第二步：構(gòu)建基因表達載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對，所以能像“準星”一樣， 將表達載體準確地帶到靶基因的位置。

第三步：將表達載體導入胚胎干細胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干細胞增殖、篩選。

請根據(jù)上述資料，回答下列問題：

（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)�入受體細胞前，應(yīng)首先完成                 。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細胞通常是             ；若用大腸桿菌儲存目的基因，則需先將其處理為             細胞。

（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是             。

（4）獲得的小鼠，通過有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因             。

 基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來的一門新興技術(shù)�！盎�因敲除細胞”的構(gòu)建過程如下：

第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細胞（ES），在培養(yǎng)基中擴增。這些細胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。

第二步：構(gòu)建基因表達載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對，所以能將表達載體準確地帶到靶基因的位置。

第三步：將表達載體導入胚胎干細胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干細胞增殖、篩選。基本原理如下圖所示。

請根據(jù)上述資料，回答下列問題：

（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)�入受體細胞前，應(yīng)首先完成              ，在這過程中所需要的工具酶是                              。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細胞通常是            。若用大腸桿菌儲存目的基因，則需先將其處理為             細胞。

（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是                               。

（4）（2）中獲得的小鼠，通過有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因？       。為什么?             。

基因敲除是80年代后半期應(yīng)用DNA同源重組原理發(fā)展起來的一門新技術(shù)。實際上是一套組合分子生物學技術(shù),包括基因重組、細胞分離培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)等。80年代初，胚胎干細胞（ES細胞）分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)。1985年，首次證實的哺乳動物細胞中同源重組的存在奠定了基因敲除的理論基礎(chǔ)。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES細胞基因敲除的小鼠模型。此后的幾年中，基因敲除技術(shù)得到了進一步的發(fā)展和完善。 “基因敲除細胞”的構(gòu)建過程如下：

第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細胞（ES），在培養(yǎng)基中擴增。這些細胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。

第二步：構(gòu)建基因表達載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入新霉素抵抗基因等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對，所以能像“準星”一樣， 將表達載體準確地帶到靶基因的位置。

第三步：將表達載體導入胚胎干細胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干細胞增殖、篩選。

基本原理如下圖所示。

請根據(jù)上述資料，回答下列問題：

（1）“從小鼠囊胚中分離出胚胎干細胞（ES），在培養(yǎng)基中擴增”需要利用_______________酶處理使其成為_______________，再進行細胞培養(yǎng)；進行培養(yǎng)時，培養(yǎng)液中除葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素外，還要加入_______________。 “基因敲除技術(shù)”以胚胎干細胞作為受體細胞是因為胚胎干細胞具有          性。

（2）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)�入受體細胞前，應(yīng)首先完成           ，在這

過程中所需要的工具酶是                。

（3）基因改造后的胚胎干細胞需要篩選，是一項的非常重要工作，原因是              。

（4）“基因基因敲除技術(shù)” 應(yīng)用到DNA同源重組原理涉及的變異類型實際上是         。

（5）如果通過上圖表示的過程，獲得一枚“敲除”一個靶基因的胚胎干細胞，并培養(yǎng)成一只克隆小鼠，獲得的小鼠，通過有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因？為什么?  

      ，                                                                 。

（6）上述資料中新霉素抵抗基因的作用最可能是              。

（7）科學家利用“基因敲除”技術(shù)進行研究時，對照組是_______________。由于實驗動物的基因組中_______________，所以通過實驗動物與正常動物性狀的比較，能夠發(fā)現(xiàn)實驗動物的_______________，從而確定被敲除基因的功能。