Question

8．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，需經(jīng)細菌的分解才能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，下列是從土壤中分離分解尿素細菌的有關問題，請分析回答：
（1）如圖是利用平板劃線法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面．除此方法外，常用的微生物接種方法還有稀釋涂布平板法（寫一種）．
（2）如果要對培養(yǎng)的菌落進行純化，在培養(yǎng)基上劃線操作中，操作的第一步及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是對接種環(huán)進行滅菌，灼燒的接種環(huán)冷卻后才能接種的原因是防止高溫殺死需接種的微生物．
（3）下面是兩種培養(yǎng)基配方
表1：A培養(yǎng)基配方

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	葡萄糖	尿素	瓊脂	H2O
1.4g	2.1g	0.2g	10.0g	1.0g	15.0g	1000mL

表2：B培養(yǎng)基配方

纖維 素粉	NaNO3	Na2HPO4•7H2O	KH2PO4	MgSO4•7H2O	KCl	酵母 浸膏	H2O
5g	1g	1.2g	0.9g	0.5g	0.5g	0.5g	1000mL

①配制培養(yǎng)基的操作步驟bdcea（用字母順序回答）．
a．倒平板    b．計算    c．溶化    d．稱量    e．滅菌
②通常培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時，平板冷凝后，應將平板倒置，目的是防止培養(yǎng)皿內壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基．
③如果要分離土壤中能分解尿素的細菌，應選擇上述A （A、B）配方的培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，可初步鑒定出該種細菌能否分解尿素．
④據(jù)B培養(yǎng)基的成分，所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型．
（4）如果進一步從尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技術擴增，則每次循環(huán)復制可分為變性、復性和延伸三步．而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它們能合成脲酶，該物質被提取出后的純化方法通常是凝膠色譜法．

Answer 1

分析 1、常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
2、常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌．
3、制備固體培養(yǎng)基的步驟是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．
4、如果要分離土壤中能分解尿素的細菌，應選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基；在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，細菌合成的脲酶將尿素分解為氨，PH增高，使指示劑變紅色．
5、PCR技術的原理是體外DNA的復制，該過程的每次循環(huán)可以分為高溫變性（DNA解鏈）、低溫復性（引物結合到互補DNA鏈）、中溫延伸（Taq酶從引物起始進行互補鏈的合成）三步．
6、對蛋白質進行純化的方法通常是凝膠色譜法．

解答 解：（1）題圖中微生物的接種中使用了接種環(huán)，且是在固體培養(yǎng)基上接種，其接種方法是平板劃線法，平板劃線法是用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，從而將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面的接種方法；除此方法外，常用的微生物接種方法還有稀釋涂布平板法．
（2）接種環(huán)通過灼燒滅菌，灼燒的接種環(huán)需冷卻后才能接種的原因是防止高溫殺死需接種的微生物．
（3）①配制培養(yǎng)基的操作步驟是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．
②培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時，平板冷凝后，應將平板倒置，目的是防止培養(yǎng)皿內壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基．
③如果要分離土壤中能分解尿素的細菌，應選擇上述以尿素為唯一氮源的A培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，可初步鑒定出該種細菌能否分解尿素．
④B培養(yǎng)基的成分中，碳源為有機物，可判斷所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型．
（4）利用PCR技術擴增DNA的過程中，每次循環(huán)復制可分變性、復性好和延伸三步；尿素分解菌能分解尿素的直接原因是尿素分解菌能合成脲酶，脲酶能催化尿素的分解，脲酶的化學本質是蛋白質，該物質被提取出后的純化方法通常是凝膠色譜法．
故答案為：
（1）平板劃線     稀釋分散    稀釋涂布平板法
（2）滅菌 防止高溫殺死需接種的微生物
（3）①bdcea    ②高壓蒸汽滅菌 防止培養(yǎng)皿內壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基    ③A 酚紅  ④異養(yǎng)型
（4）變性、復性和延伸    脲酶   凝膠色譜法

點評 本題考查了微生物培養(yǎng)、PCR技術、蛋白質的純化的相關知識，考生識記培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分、培養(yǎng)微生物常用的接種方法、PCR技術的步驟，明確鑒定培養(yǎng)基鑒定微生物的原理和凝膠色譜法分離物質的原理是解題的關鍵．