Question

【題目】基因工程與微生物

如圖1表示制備抗體的兩個途徑的模式圖。圖2是圖1普通質(zhì)粒的放大，其上有3種限制酶的酶切位點，復(fù)制原點是質(zhì)粒復(fù)制不可或缺的序列。

（1）下列關(guān)于Y細(xì)胞的敘述，錯誤的是______。

A．Y細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞

B．既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外快速增殖

C．圖1中過程①使用的是細(xì)胞融合技術(shù)

D．Y細(xì)胞的增殖需要細(xì)胞分裂素

（2）據(jù)圖1分析，下列敘述中正確的有______。（多選）

A．制備抗體2的途徑中，目的基因是V1基因

B．圖示獲取目的基因的方法是化學(xué)方法人工合成

C．獲得Y細(xì)胞的過程不需要篩選

D．抗體1和抗體2的結(jié)構(gòu)不完全相同

（3）限制酶可用于基因工程中的______。（多選）

A．獲取目的基因

B．重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞

C．目的基因與運載體重組

D．篩選含目的基因的受體細(xì)胞

（4）據(jù)圖2，綜合考慮基因工程的步驟，若只能選擇一種限制酶切割質(zhì)粒，該限制酶應(yīng)是______，寫出你作出判斷的理由：______。

（5）為篩選圖1中的大腸桿菌，采用的培養(yǎng)基部分成分如表。下列敘述錯誤的是______。

牛肉膏	0.5g
蛋白胨	1g
NaCl	0.5g
瓊脂	2g
水	200mL

A．此培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基

B．篩選時需要用到氨芐青霉素和新霉素

C．配制此培養(yǎng)基需要高壓滅菌

D．培養(yǎng)基配制過程中應(yīng)先調(diào)pH再定容

Answer 1

【答案】D ABD AC PstI BamHI會破壞復(fù)制原點，導(dǎo)致質(zhì)粒無法復(fù)制且無法篩選；EcoRI能破壞標(biāo)記基因，導(dǎo)致后續(xù)無法篩選 D

【解析】

1、據(jù)圖1分析，細(xì)胞A表示效應(yīng)B細(xì)胞，細(xì)胞Y表示雜交瘤細(xì)胞，結(jié)構(gòu)甲表示基因表達(dá)載體，①過程表示動物細(xì)胞融合，②過程表示雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，③過程表示提取信使RNA，④過程表示逆轉(zhuǎn)錄，⑤表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，⑥表示導(dǎo)入受體細(xì)胞。

2、分析圖2可知，該質(zhì)粒上存在上限制酶的酶切位點，即限制酶PstI、限制酶BamHI和限制酶EcoRI，但是BamHI的識別序列位于復(fù)制原點內(nèi)，一旦用其切割會破壞復(fù)制原點，導(dǎo)致質(zhì)粒無法復(fù)制且無法篩選；EcoRI的識別位點位于標(biāo)記基因內(nèi)，切割后會破壞標(biāo)記基因，導(dǎo)致后續(xù)無法篩選，因此選擇限制酶PstI進(jìn)行酶切不會影響載體的功能。

3、分析表格中培養(yǎng)基的成分可知，含有瓊脂，瓊脂屬于凝固劑，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的配制流程：計算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板。

培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

（1）由圖1可知，細(xì)胞Y表示雜交瘤細(xì)胞，但Y細(xì)胞的增殖不需要細(xì)胞分裂素。

（2）據(jù)圖1分析，下列敘述中正確的有制備抗體2的途徑中，目的基因是V1基因；圖示獲取目的基因的方法是化學(xué)方法人工合成；抗體1和抗體2的結(jié)構(gòu)不完全相同。獲得Y細(xì)胞的過程需要篩選。

（3）限制酶可用于基因工程中的獲取目的基因、目的基因與運載體重組兩個過程。

（4）切割質(zhì)粒時要保證目的基因和復(fù)制原點不被破壞，因此選擇限制酶PstI酶切割較為理想。據(jù)圖2可知，BamHI會破壞復(fù)制原點，導(dǎo)致質(zhì)粒無法復(fù)制且無法篩選；EcoRI能破壞標(biāo)記基因，導(dǎo)致后續(xù)無法篩選。

（5）為篩選圖1中的大腸桿菌，采用的培養(yǎng)基部分成分如表，根據(jù)表格結(jié)果分析，培養(yǎng)基配制過程中應(yīng)先定容后再調(diào)pH值，即D錯誤。