Question

【題目】HIV是艾滋病的病原體，由蛋白質(zhì)和RNA組成。準確的檢測出HIV是及時治療艾滋病的前提，目前在醫(yī)學上采用的檢測方法有蛋白質(zhì)檢測和核酸檢測。請回答下列問題：

（1）提取HIV的RNA，通過____________過程獲得_____________，用于PCR擴增。PCR技術(shù)需用到的關(guān)鍵酶是_______________。利用擴增產(chǎn)物獲取HIV的S蛋白基因，構(gòu)建基因表達載體后導入受體細胞，從受體細胞中分離出S蛋白并純化，用于檢測疑似病例血清中的________________（填“抗原”或“抗體”），該檢測的原理是________________________。

（3）核酸檢測采用逆轉(zhuǎn)錄熒光PCR技術(shù)（RT-PCR技術(shù)），其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是研制特異性基因探針。檢測HIV采用的是______________（填“人”或“HIV”）的帶熒光的一段特異性的___________________作為探針。

（4）疑似患者體內(nèi)取樣提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄后以病毒的__________________為引物進行PCR擴增，同時加入特異性探針，若在擴增中探針能與待測DNA雜交，就表明待測個體攜帶HIV。該檢測的原理是________________________________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄 cDNA 熱穩(wěn)定性DNA聚合酶 抗體 抗原-抗體分子雜交 HIV DNA序列 一段特異性DNA序列 DNA分子雜交

【解析】

目的基因是否在轉(zhuǎn)基因生物體內(nèi)存在的檢測方法是采用DNA分子雜交技術(shù)，即將轉(zhuǎn)基因生物的基因天組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。其次，還需要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，這是檢測目的基因是否發(fā)揮功能作用的第一步。檢測方法同樣是采用分子雜交技術(shù)，與上述方法不同之處是從轉(zhuǎn)基因

生物中提取的是mRNA，同樣用標記的目的基因作探針，與mRNA雜交，如果顯示出雜交帶，則表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA。最后，檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。檢測的方法

與上述方法有所不同，是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應的抗體進行抗原一抗體雜交， 若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。除了上述的分子檢測外，有時還需要進行個體生物學水平的鑒定。例如，一個抗蟲或抗病的目的基因?qū)�入植物細胞后，是否賦予了植物抗蟲或抗病特性，需要做抗蟲或抗病的接種實驗。

（1）HIV病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，若要進行其遺傳物質(zhì)的擴增，需要首先提取HIV的RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄過程獲得cDNA，用于PCR擴增。PCR技術(shù)需要通過高溫使氫鍵斷裂獲得DNA單鏈，故在擴增過程中需用到熱穩(wěn)定性高的DNA聚合酶。然后，利用擴增產(chǎn)物獲取HIV的S蛋白基因，構(gòu)建基因表達載體后導入受體細胞，從受體細胞中分離出S蛋白并純化，可用于檢測疑似病例血清中的抗體，從而完成病人的檢測，該檢測的原理是抗原--抗體分子雜交。

（3）核酸檢測采用逆轉(zhuǎn)錄熒光PCR技術(shù)（RT-PCR技術(shù)），其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是研制特異性基因探針。探針通常是目的基因及添加上熒光標記做成的，故此，檢測HIV采用的是HIV的帶熒光的一段特異性的DNA序列作為探針。

（4）疑似患者體內(nèi)取樣提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄后以病毒的一段特異性DNA序列為引物進行PCR擴增，在病毒引物的作用下，若逆轉(zhuǎn)錄出的DNA中有該病毒的相關(guān)DNA，則可以擴增出病毒的DNA，這時加入病毒的特異性探針，若在擴增中探針能與待測DNA雜交，就表明待測個體攜帶HIV。上述檢測方法的原理是DNA分子雜交。