Question

【題目】將鼠的精子在保存液內(nèi)與含有A基因的重組質(zhì)粒保溫30 min，然后用于人工授精，共培育出127只小鼠。待小鼠生長(zhǎng)至適宜大小時(shí)，對(duì)其中的36只進(jìn)行PCR和DNA分子雜交檢測(cè)。結(jié)果表明，有6只攜有A基因的轉(zhuǎn)基因鼠，且體型大約為普通鼠的2倍。請(qǐng)回答下列有關(guān)問題：

（1） A基因（目的基因）表達(dá)效果與________基因相同。

（2）利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增目的基因，PCR 技術(shù)的原理是___，該反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含擴(kuò)增緩沖液、____、___、Taq 酶、引物等；引物應(yīng)選用下圖中的_____（填圖中標(biāo)號(hào)）。

（3）檢測(cè)A基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA時(shí)，需要用_________做探針，再與相應(yīng)的物質(zhì)雜交。

（4）在胚胎移植前對(duì)胚胎進(jìn)行了檢查和篩選，發(fā)現(xiàn)有些胚胎因?yàn)橥庠椿�因的插入而死亡，外源基因插入�?dǎo)致胚胎死亡的原因可能是_______________。

Answer 1

【答案】生長(zhǎng)激素 DNA雙鏈復(fù)制 模板DNA dNTP（四種脫氧核苷酸或脫氧核糖核苷三磷酸） A、D 放射性同位素標(biāo)記的含目的基因的DNA片段 外源基因的插入導(dǎo)致胚胎正常發(fā)育所需的基因不能表達(dá)

【解析】

1、PCR技術(shù)反應(yīng)的條件：①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境；②DNA模板；③合成引物；④四種脫氧核苷酸；⑤耐熱的DNA聚合酶；⑥溫控設(shè)備。

2、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）題干信息中“轉(zhuǎn)入A基因的老鼠的體型大約為普通老鼠的2倍”，說明A基因（目的基因）表達(dá)效果與生長(zhǎng)激素基因相同。

（2）PCR是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，其原理是DNA雙鏈復(fù)制。PCR反應(yīng)體系包含緩沖液、Taq酶、原料（四種脫氧核苷酸或脫氧核糖核苷三磷酸）、引物以及模板（模板DNA）；引物應(yīng)選用圖中的A和D。

（3）檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA時(shí)，需要用標(biāo)記的目的基因片段（放射性同位素標(biāo)記）做探針，再與相應(yīng)的物質(zhì)雜交。

（4）胚胎移植前對(duì)胚胎進(jìn)行了檢查和篩選，發(fā)現(xiàn)有些胚胎因?yàn)橥庠椿�因的插入而死亡，可能原因是外源基因的插入�?dǎo)致胚胎發(fā)育所需的正�；�因不能表達(dá)。