Question

【題目】基因工程的第一步是獲取目的基因。某科研工作者欲將人的胰島素基因?qū)�入大腸桿菌，從而去獲取更多的胰島素。該科研工作者先從人體胰島B細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，然后再通過(guò)_______________過(guò)程去獲得胰島素基因即目的基因。

（1）基因工程的第二步是將目的基因和運(yùn)載體進(jìn)行重組。此時(shí)，需要選擇合適的限制酶和_______酶。常用的運(yùn)載體是細(xì)菌質(zhì)粒（如圖所示），質(zhì)粒中ori為質(zhì)粒復(fù)制所必需的DNA序列，啟動(dòng)子是使轉(zhuǎn)錄開(kāi)始的一段DNA序列，終止子是提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列。青霉素抗性基因作為__________基因，以便于篩選。質(zhì)粒上還有多種限制酶的切點(diǎn)，若目的基因上也有相應(yīng)限制酶切點(diǎn)，為避免自身環(huán)化并確保目的基因與圖中質(zhì)粒準(zhǔn)確重組，可選用的限制酶是_____。

A. NdeI和XbaI B．NdeI和BamHI

C．XbaI D．PstI E．BamHI

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄 DNA連接 標(biāo)記 B

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

基因工程的第一步是獲取目的基因，獲取的方法包括從某種生物體細(xì)胞中分離和化學(xué)方法人工合成。獲取人的胰島素基因，反轉(zhuǎn)錄法的做法是從人體胰島B細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，再通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程獲取目的基因。

（1）將目的基因和運(yùn)載體重組時(shí)需要選擇合適的限制酶和DNA連接酶，以保留ori、啟動(dòng)子、終止子，同時(shí)保留青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，以便于篩選。為避免目的基因自身的環(huán)化并能與圖中質(zhì)粒準(zhǔn)確重組，應(yīng)選用兩種不同的限制酶，可選用的限制酶是NdeI和BamHI，選擇NdeI和XbaI會(huì)導(dǎo)致終止子被切除。B正確。