Question

（13分）回答下列有關基因工程問題。

草甘膦是一種廣譜除草劑，其除草機制是抑制植物體內EPSPS酶的合成，最終導致植物死亡。但是，它的使用有時也會影響到農作物的正常生長。目前，已發(fā)現可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉入農作物植物細胞內，從而獲得的轉基因植物就能耐受高濃度的草甘膦。

（1）下圖A-F表示6株植物，其中，植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經過了轉基因處理，但是是否成功還未知。若A-C澆清水，D-F澆的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成長的是_________。

（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是 。

圖所示的酶M和酶N是兩種限制酶，圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類，其它堿基的種類未作注明。

酶M特異性剪切的DNA片段是 ，則酶N特異性剪切的DNA片段是 。

多個片段乙和多個片段丁混合在一起，用DNA連接酶拼接得到環(huán)狀DNA，其中只由兩個DNA片段連接成的環(huán)狀DNA分子有 種。

圖的A和B分別表示兩段DNA序列。表格分別表示4種限制性核酸內切酶的酶切位點。

（3）據圖：假設位于EPSPS基因兩側的DNA序列均如圖A所示，則應選擇表格中酶__________進行酶切；若位于EPSPS基因兩側的DNA序列分別如圖A和B所示，則應選擇表中酶__________進行酶切。

（4）假設大腸桿菌突變菌株甲中EPSPS基因的右側序列如圖B所示，請在方框內畫出經酶切后產生的兩個末端的堿基序列。（2分）

圖甲是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000對堿基）與pUC18質粒（2.7kb）重組的示意圖。圖中Ap′是抗氨芐青霉素基因，lacZ是顯色基因，其上的EcoRI識別位點位于目的基因插入位點的右側，其控制合成某種酶能將無色染料X-gal變成藍色，最終能在含無色染料X-gal的培養(yǎng)基上將含該基因的菌落染成藍色。（圖乙中深色圓點即為藍色菌落）

（5）將處理后的目的基因EPSPS與pUC18質粒、DNA連接酶混合后，再與某菌種混合，若要從混合物中篩選出含EPSPS基因的菌株，在圖三十二乙的培養(yǎng)基中必須加入 。請判斷圖乙中所出現的白色和藍色兩種菌落中，何種顏色菌落會含有重組質粒___________。

（6）現用EcoRI酶切質粒，酶切后進行電泳觀察，若出現長度為_________kb和 kb的片段，則可以判斷該質粒已與目的基因重組成功。（重組質粒上目的基因的插入位點與EcoRI的識別位點之間的堿基對忽略不計）。假設EPSPS基因已被成功轉移到植物F中，但植物F仍沒有表現出抗性，分析可能的原因是 。

Answer 1