Question

【題目】普通煙草轉(zhuǎn)入抗鹽基因培育抗鹽煙草的過程如下圖所示。已知含抗鹽基因的DNA和質(zhì)粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位點，質(zhì)粒上另有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。請回答問題：

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)選用的限制酶是____________，然后對質(zhì)粒和________進行切割，以保證它們定向連接。

（2）質(zhì)粒的基本單位是 。

（3）切割后的目的基因與質(zhì)粒由_______酶連接成重組質(zhì)粒。篩選導入重組質(zhì)粒的細菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入______________________________，

理由是___________________________________________________________________。

（4）若質(zhì)粒被某一限制酶識別的序列是一GAATTC一，并在G與A之間切割。請畫出被切割后所形成的黏性末端

Answer 1

【答案】

（1）salⅠ、 HindⅢ酶 含抗鹽基因的DNA

（2） 脫氧核苷酸

（3）DNA連接 氨芐青霉素 因為重組質(zhì)粒帶有抗氨芐青霉素基因，在添加青霉素的培養(yǎng)基中可以存活

（4）

一G↓GATCC一 一G GATCC一

→ +

一CCTAG↓G一 一CCTAG G一

【解析】

（1）分析題圖可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)選用salⅠ酶和HindⅢ酶對含抗鹽基因的外源DNA和質(zhì)粒進行切割，這樣會形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、質(zhì)粒的自身連接，以保證目的基因和質(zhì)粒的定向連接．限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸的脫氧核糖和磷酸之間的磷酸二酯鍵．

（2）質(zhì)粒的基本單位是脫氧核苷酸。

（3）DNA連接酶可將切割后的目的基因與質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒．根據(jù)圖中信息可知重組質(zhì)粒帶有抗氨芐青霉素基因，但四環(huán)素基因已被限制酶破壞，所以在篩選導入重組質(zhì)粒的細菌時，可在不同培養(yǎng)基中分別加入氨芐青霉素、四環(huán)素，在添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能成活，但在添加四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能成活的即為導入重組質(zhì)粒的細菌．

（4）見答案。