Question

13．家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力．將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥．
（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞．
（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動(dòng)子和終止子之間；若要檢測(cè)干擾素基因在家蠶細(xì)胞中是否表達(dá)，可以采用的方法有分子雜交、抗原-抗體結(jié)合．
（3）通過(guò)PCR技術(shù)可大量獲取目的基因．PCR反應(yīng)體系主要包括：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和對(duì)干擾素基因特異性的DNA引物對(duì)．
（4）一般常采用法將干擾素基因?qū)�入家蠶的細(xì)胞．培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，經(jīng)過(guò)和可得到大量的細(xì)胞；在培養(yǎng)過(guò)程中，家蠶細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)出和特點(diǎn)．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．
2、從分子水平上檢測(cè)目的基因的方法：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
3、PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）等．

解答 解：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要用胰蛋白酶處理動(dòng)物組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞．
（2）基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因，其中啟動(dòng)子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端．基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)步驟，要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，可采用分子雜交技術(shù)，要檢測(cè)目的基因是否翻譯，可采用抗原-抗體雜交法．
（3）采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因時(shí)，其體系主要包括：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、耐高溫的DNA聚合酶（taq酶）和對(duì)干擾素基因特異性的DNA引物對(duì)．
（4）培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．
故答案為：
（1）胰蛋白（或膠原蛋白酶）
（2）啟動(dòng)子 終止子 分子雜交 抗原-抗體結(jié)合
（3）TaqDNA聚合酶 對(duì)干擾素基因特異性的DNA引物對(duì)
（4）增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積

點(diǎn)評(píng) 本題綜合考查基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、生態(tài)工程原理等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的具體過(guò)程；掌握生態(tài)工程的原理及一般實(shí)例，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．