Question

【題目】酵母的蛋白質含量可達自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請回答下列問題：

（1）配制培養(yǎng)基時，按照培養(yǎng)基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調節(jié)培養(yǎng)基的____________________，及時對培養(yǎng)基進行分裝，并進行____________________滅菌。

（2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約_______________（在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。

（3）挑取分離平板中長出的單菌落，按步驟④所示進行劃線。下列敘述合理的有___________________。

a．為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌

b．劃線時應避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落

c．挑取菌落時，應挑取多個菌落，分別測定酵母細胞中甲醇的含量

d．可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株

（4）步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和__________________供應。為監(jiān)測酵母的活細胞密度，將發(fā)酵液稀釋1000倍后，經(jīng)等體積臺盼藍染液染色，用25×16型血細胞計數(shù)板計數(shù)5個中格中的細胞數(shù)，理論上_______色細胞的個數(shù)應不少于__________，才能達到每毫升3×109個活細胞的預期密度。

Answer 1

【答案】pH 高壓蒸汽（濕熱） 50 ℃ a、b、d 氧氣 無 30

【解析】

配制培養(yǎng)基的操作步驟為稱量→溶化→定容→調pH→培養(yǎng)基的分裝→包扎→滅菌。據(jù)圖分析，從土壤樣品中分離該類酵母的實驗流程為①稱量土樣→②梯度稀釋→③平板澆注分離→④劃線純化→⑤擴大培養(yǎng)。

（1）配制培養(yǎng)基時，按照培養(yǎng)基配方準確稱量、溶化，然后調節(jié)培養(yǎng)基的pH并對培養(yǎng)基進行分裝，接著利用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。

（2）在步驟③中待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時倒平板。

（3）接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌，做到無菌操作，a正確；劃線時應避免劃破培養(yǎng)基表面，以防止大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落，b正確；該實驗的目的是獲得利用工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母菌，不需要測定酵母菌中的甲醇含量，c錯誤；可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株，d正確。

（4）酵母菌通過有氧呼吸大量繁殖，因此為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和氧氣；活細胞膜具有選擇透過性，經(jīng)等體積臺盼藍染液染色，無色細胞才能計數(shù)；為監(jiān)測酵母的活細胞密度，將發(fā)酵液稀釋1000倍后，用25×16型血細胞計數(shù)板計數(shù)5個中格中的細胞數(shù)（假設為n），達到每毫升3×109個活細胞的預期密度，而臺盼藍與菌液等體積加入，則n÷80×400÷（0.1×103）×1000÷2=3×109，n=30，即每個中方格中酵母菌不少于30。