【題目】苧麻纖維被普遍應(yīng)用于紡織和造紙行業(yè),但其中含有的膠質(zhì)必須被去除;與傳統(tǒng)的高溫堿煮相比,芽孢桿菌產(chǎn)生的堿性果膠酶用于苧麻脫膠具有降低能耗和化學(xué)污染的優(yōu)勢,因此獲得高表達(dá)的堿性果膠酶基因工程菌,低成本生產(chǎn)堿性果膠酶對于紡織工業(yè)節(jié)能減排具有重要的意義。請回答下列問題:

(1)芽孢桿菌在產(chǎn)生堿性果膠酶的同時會分泌出對纖維有害的內(nèi)源性纖維素酶,因此將堿性果膠酶基因pel轉(zhuǎn)入畢赤酵母中表達(dá),該過程需要_________________(工具酶)和載體,作為載體必須具備能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定保存,以及______________(至少答出兩點)等條件。

(2)構(gòu)建的基因表達(dá)載體應(yīng)含有畢赤酵母的啟動子作為_____________酶識別和結(jié)合的部位,從而啟動目的基因的表達(dá);同時還應(yīng)含有標(biāo)記基因,其作用是___________________。

(3)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入畢赤酵母時,應(yīng)采用_______________________處理,使其處于________________________________。

(4)目的基因在受體細(xì)胞是否能翻譯出蛋白質(zhì),可用______________技術(shù)來檢測。也可將導(dǎo)入目的基因的畢赤酵母接種于果膠底物平板上28℃培養(yǎng), 2–3 d 后觀察結(jié)果如下圖(A為剛接種時,B為培養(yǎng)2–3d后),水解圈越大代表___________________________。

【答案】 限制酶和DNA連接酶 具有特定的限制酶切割位點、具有某些標(biāo)記基因 RNA聚合 將含有基因表達(dá)載體的畢赤酵母篩選出來 鈣離子(Ca2+ 感受態(tài) 抗原-抗體雜交 對應(yīng)菌株產(chǎn)酶能力越強(或“對應(yīng)菌株產(chǎn)酶數(shù)量越多”)

【解析】本題以堿性果膠酶高產(chǎn)菌株的構(gòu)建為背景,綜合考查學(xué)生對DNA重組技術(shù)的基本工具、基因工程的基本操作程序等相關(guān)知識的識記和理解能力。

(1) 將堿性果膠酶基因pel(目的基因)轉(zhuǎn)入畢赤酵母(受體細(xì)胞)中表達(dá),該過程需要構(gòu)建基因表達(dá)載體,此時需要限制酶和DNA連接酶作為工具酶。作為載體必須具備的條件是:一是在宿主細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制,或整合到染色體DNA上,隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制,即能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制,以便提供大量的目的基因;二是具有特定的(或一個至多個)限制酶切點,以供外源DNA片段(目的基因)插入其中;三是具有某些標(biāo)記基因,以便供重組DNA的鑒定和選擇。

(2)啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,標(biāo)記基因的作用是將含有基因表達(dá)載體的畢赤酵母(受體細(xì)胞)篩選出來。

(3) 畢赤酵母屬于單細(xì)胞的微生物;將基因表達(dá)載體導(dǎo)入畢赤酵母時,應(yīng)采用鈣離子(Ca2+)處理畢赤酵母,使其處于感受態(tài)。

(4) 目的基因在受體細(xì)胞是否能翻譯出蛋白質(zhì),可用抗原-抗體雜交技術(shù)來檢測。導(dǎo)入目的基因的畢赤酵母產(chǎn)生的堿性果膠酶能水解平板上的果膠,形成水解圈;水解圈越大,代表對應(yīng)菌株產(chǎn)酶能力越強(或“對應(yīng)菌株產(chǎn)酶數(shù)量越多”)。

練習(xí)冊系列答案
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【題目】現(xiàn)在艾滋病病毒的感染者在各國逐年增加,已檢測發(fā)現(xiàn)艾滋病病毒含尿嘧啶(U),則其含有的物質(zhì)是(  )

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A. DNA 和 RNA 中僅 僅是五碳糖不同

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D. 用甲基綠和吡羅紅混合染色大腸桿菌可觀察到 DNA 主要分布于細(xì)胞核中,RNA 主要 分布于細(xì)胞質(zhì)中

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A基因型為Aa的個體自交,因基因重組而導(dǎo)致子代性狀分離

B基因重組是生物變異的根本來源

C同源染色體的非姐妹染色單體間的互換可能導(dǎo)致基因重組

D造成同卵雙生姐妹間性狀上差異的主要原因是基因重組

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【題目】A、B兩種物質(zhì)混合時加入酶C。下圖為最適溫度下A、B濃度的變化曲線。敘述錯誤的是(

A. C降低了A生成B這一反應(yīng)的活化能

B. 該體系中酶促反應(yīng)速率先快后慢

C. T2B增加緩慢是酶活性降低導(dǎo)致的

D. 適當(dāng)降低反應(yīng)溫度,T2值增大

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【題目】下圖為三個處于分裂期細(xì)胞的示意圖,下列敘述中正確的是 ( )

A. 甲可能是丙的子細(xì)胞

B. 乙、丙細(xì)胞不可能來自同一個體

C. 甲、乙、丙三個細(xì)胞均含有4條染色體

D. 甲、乙、丙三個細(xì)胞均含有同源染色體

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A. 上述五種處于不同分裂狀態(tài)或時期的細(xì)胞均取自于卵巢

B. 細(xì)胞①經(jīng)④、③、⑤產(chǎn)生生殖細(xì)胞的基因型最可能有3種

C. ②圖分裂可將遺傳物質(zhì)復(fù)制后精確地平分到兩個子細(xì)胞

D. ④圖所示細(xì)胞,分裂產(chǎn)生的子細(xì)胞中含有兩個染色體組

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【題目】關(guān)于葉綠體和線粒體的共同敘述中,不正確的是(

A. 都是雙層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器B. 所含酶的功能都相同

C. 都有基質(zhì)D. 都不存在于原核細(xì)胞中

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【題目】新疆產(chǎn)的西瓜吃起來特別甜,那么新疆產(chǎn)的西瓜的細(xì)胞中含量最多的化合物是( )

A. 蔗糖 B. 麥芽糖 C. 脂質(zhì) D.

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