Question

科研人員以金定鴨、長樂灰鵝和象洞雞的全血為實驗材料，比較苯酚一氯仿抽提法（方法A）和鹽析法（方法B）提取血液中DNA的效率．圖中EDTA具有破壞細胞膜、抑制DNA酶活性的作用，SDS具有破壞細胞膜和核膜、使蛋白質變性和抑制DNA酶活性的作用．提取過程和結果如下：

實驗結果：

測定項目	金定鴨		長樂灰鴨		象洞雞
	方法A	方法B	方法A	方法B	方法A	方法B
純度/OD值	1.95	1.96	1.85	2.36	1.96	1.90
濃度/μg?mL-1	534.29	240.00	899.17	583.33	385.35	914.17

請回答：
（1）本實驗不選擇哺乳動物血液為實驗材料的原因是

 

．
（2）步驟①中，若只用蛋白酶K消化處理．對實驗結果的影響是

 

．
（3）步驟③中．破碎細胞常用的方法是

 

．步驟⑤加人蒸餾水的目的是

 

．
（4）苯酚和氯仿-異戊醇不溶或微溶于水，密度均大于水，步驟②⑦所依據的原理是

 

．
（5）對于長樂灰鵝、象洞雞來說，較適宜的DNA提取方法分別是

 

、

 

．
（6）實驗結果表明，不同方法提取的DNA中，影響DNA純度的主要物質是

 

．相同體積的不同鳥類的血液DNA提取量有明顯差異，其原因可能是

 

．

Answer 1

考點：DNA的粗提取和鑒定

專題：

分析：根據流程圖分析，苯酚一氯仿抽提法（A法），①步驟中加入EDTA破壞細胞膜、抑制DNA酶活性的作用；SDS破壞細胞膜和核膜、使蛋白質變性和抑制DNA酶活性的作用；蛋白酶K分解蛋白質；②步驟中加入苯酚提取DNA．
鹽析法（方法B），③步驟中加入蒸餾水，使得血細胞吸水脹破；④步驟中加入氯化鈉溶液溶解DNA；⑤步驟加入蒸餾水，降低氯化鈉溶液濃度，使得DNA析出；⑥步驟加氯化鈉溶液再溶解DNA；⑧⑨加入乙醇，提取雜質較少的DNA．
根據表格中濃度和純度分析，金定鴨和長樂灰鴨適宜采用苯酚一氯仿抽提法（A法）；象洞雞適宜采用鹽析法（方法B）．

解答： 解：（1）哺乳動物成熟的紅細胞無細胞核和線粒體，DNA含量較少，不適宜作為提取DNA的實驗材料．
（2）步驟①中，若只用蛋白酶消化處理，沒有加入EDTA和SDS抑制DNA酶活性，則DNA的提取量減少，純度降低．
（3）步驟③中．血細胞液中加入一定量的蒸餾水，并用玻璃棒攪拌，使得血細胞吸水脹破；步驟⑤加入蒸餾水的目的是降低NaCl溶液的濃度（2mol/L→0.14mol/L），析出DNA．
（4）步驟②⑦所依據的原理是DNA不溶于苯酚、氯仿-異戊醇，蛋白質等雜質溶于苯酚、氯仿-異戊醇，提取雜質較少的DNA．
（5）根據表格中純度和濃度比較，長樂灰鵝DNA提取方法是苯酚一氯仿抽提法（方法A）較適宜；象洞雞是鹽析法（方法B）．
（6）實驗結果表明，不同方法提取的DNA中，影響DNA純度的主要物質是RNA；不同鳥類血液中血細胞的密度不同，則相同體積的不同鳥類的血液DNA提取量有明顯差異．
故答案為：
（1）哺乳動物成熟的紅細胞無細胞核和線粒體
（2）DNA的提取量減少，純度降低
（3）血細胞液中加入一定量的蒸餾水，并用玻璃棒攪拌    降低NaCl溶液的濃度，析出DNA
（4）DNA不溶于苯酚、氯仿-異戊醇，蛋白質等雜質溶于苯酚、氯仿-異戊醇
（5）苯酚一氯仿抽提法（方法A）       鹽析法（方法B）
（6）RNA      不同鳥類血液中血細胞的密度不同（或不同鳥類血細胞中DNA含量不同）

點評：本題考查DNA的粗提取實驗，意在考查學生識記基礎知識和解決問題的能力，屬于中檔題．