Question

目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)下如圖乙的一所示．

（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于

 

．
（2）pBR322分子中有單個(gè)EcoRI限制酶作用位點(diǎn)，EcoR 1只能識(shí)別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割．若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRI的切點(diǎn)，請(qǐng)畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端

 

．
（3）為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒中是否導(dǎo)入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落．再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對(duì)照無菌落的位置）．與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是

 

，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是

 

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Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：本題考查了標(biāo)記基因的生理功能是便于鑒定受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入目的基因．菌落能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基生存，說明了菌落含有抗氨芐青霉素基因；將沾上菌落絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，仍能生長(zhǎng)，說明了菌落也含有抗四環(huán)素基因．

解答： 解：（1）質(zhì)粒上的抗性基因可作標(biāo)記基因，便于鑒定受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入目的基因．
（2）在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn)，即目的基因兩側(cè)有-GAATTC-，目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端為．
（3）DNA連接酶能連接磷酸二酯鍵．經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因能連接起來，說明這兩種酶切割獲得的黏性末端相同．
（4）圖二中的菌落能抗氨芐青霉素，將滅菌絨布按到圖二中培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到圖三含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，仍能生長(zhǎng)的也能抗四環(huán)素，空圈為不能抗四環(huán)素的（只能抗氨芐青霉素）．圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌既能抗氨芐青霉素，又能抗四環(huán)素，說明導(dǎo)入的是pBR322質(zhì)粒，而不是重組質(zhì)粒（重組質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因被切斷，不能表達(dá)，因此含重組質(zhì)粒的大腸桿菌抗氨芐青霉素）．
故答案為：
（1）篩選（鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞）
（2）
（3）能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素      既能抗氨芐青霉素，又能抗四環(huán)素的pBR322質(zhì)粒

點(diǎn)評(píng)：本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力，及能會(huì)鑒別、選擇試題給出的圖表生物學(xué)信息，并能運(yùn)用這些信息，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問題．