Question

【題目】SARS-COV-2病毒導(dǎo)致的新型肺炎正在全世界大流行，某研究機(jī)構(gòu)試圖利用下圖流程來制備抗SARS-COV-2的單克隆抗體，以降低病毒的危害。據(jù)此分析回答下列問題：

（1）誘導(dǎo)細(xì)胞融合常用的誘導(dǎo)因素有_______。細(xì)胞融合完成后，融合體系中有_____種兩兩融合細(xì)胞。

（2）體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的過程中，合成培養(yǎng)基中還需加入適量的_______（填“生長(zhǎng)素”“細(xì)胞分裂素”或“血清”），其目的是_______。

（3）通過多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)時(shí)要將第一次篩選所得培養(yǎng)液稀釋至每毫升7~10個(gè)細(xì)胞，然后每孔滴入0．1mL細(xì)胞稀釋液進(jìn)行培養(yǎng)，這樣做的目的是_________。

（4）通過該途徑制作的單抗具有免疫原性和超敏反應(yīng)等問題，為克服這些問題，科學(xué)家利用基因工程生產(chǎn)單克隆抗體，該工程的核心是_________，其目的是_________。

Answer 1

【答案】聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激 3 血清 補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的營養(yǎng)物質(zhì) 篩選既能無限分裂又能分泌抗SARS-COV-2抗體的雜交瘤細(xì)胞（或使每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞，從而選出產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群） 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 使目的基因能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定保存，并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

【解析】

抗體是由B淋巴細(xì)胞分泌的，每一種B淋巴細(xì)胞只能分泌一種抗體。要想獲得大量的單一抗體，需要將某一種B淋巴細(xì)胞大量克隆，但在體外培養(yǎng)的條件下，B淋巴細(xì)胞不能無限增殖，而癌細(xì)胞(骨髓瘤細(xì)胞)可以在體外無限增殖。科學(xué)家將這兩種細(xì)胞通過滅活的病毒等方法誘導(dǎo)融合，在特定的選擇培養(yǎng)基中篩選出雜交瘤細(xì)胞，再將雜交瘤細(xì)胞分開培養(yǎng)，從中選育出產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞，再進(jìn)行體外大規(guī)模培養(yǎng)，從而獲得大量的單克隆抗體。單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)、靈敏度高，可被廣泛應(yīng)用到疾病診斷、治療和預(yù)防等方面。

（1）誘導(dǎo)細(xì)胞融合常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。細(xì)胞融合完成后，融合體系中有B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞，共3種兩兩融合細(xì)胞。

（2）由于人們對(duì)細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此，在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需加入血清、血漿等一些天然成分，以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的營養(yǎng)物質(zhì)。

（3）將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7~10個(gè)細(xì)胞/mL，每孔滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液，其目的是使每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞，從而選出產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群，使得到的抗體純度更高。

（4）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，使用限制酶和DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成基因表達(dá)載體，使目的基因能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定保存，并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。