Question

【題目】圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現(xiàn)在要培養(yǎng)乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科學(xué)家要將該基因通過(guò)___________（方法）注入羊的_______________中，發(fā)育完全的母羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。

（2）圖2中的目的基因D需要同時(shí)使用MestI和PstI才能獲得，而圖1所示的質(zhì)粒無(wú)限制酶MestI的酶切位點(diǎn)。所以在用該質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需要對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造，構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)。試幫助完成構(gòu)建需要的限制酶切位點(diǎn)的過(guò)程（提供構(gòu)建需要的所有條件）：首先用______酶處理質(zhì)粒；然后用______處理質(zhì)粒，使被切開(kāi)的質(zhì)量末端鏈接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用______ 處理質(zhì)粒形成限制酶切位點(diǎn)，它可被______識(shí)別。（供選答案如下：①EcoRI ②MestI ③PstI ④DNA連接酶 ⑤DNA聚合酶）

（3）假設(shè)圖1質(zhì)粒上還有一個(gè)PstI的識(shí)別序列，現(xiàn)用EcoRI、PstI單獨(dú)或聯(lián)合切割同一質(zhì)粒，得到的DNA長(zhǎng)度片段如下表。請(qǐng)?jiān)谙聢D中畫(huà)出質(zhì)粒上EcoRI和PstI的切割位點(diǎn)。（標(biāo)出酶切位點(diǎn)之間的長(zhǎng)度）

______

Answer 1

【答案】 顯微注射法 受精卵 ① ⑤ ④ ②

【解析】試題分析：分析圖1、圖2：質(zhì)粒只有EcoR I酶和Pst I酶的識(shí)別位點(diǎn)，外源DNA分子含有Mse I酶、EcoR I酶和Pst I酶識(shí)別位點(diǎn)，且切割獲得目的基因需要Mse I酶和Pst I酶。

（1）若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現(xiàn)在要培養(yǎng)乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，使用顯微注射法注射到羊的受精卵中，則發(fā)育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。

（2）對(duì)質(zhì)粒改造使，需構(gòu)建新的限制酶酶切位點(diǎn)．首先用①EcoRⅠ處理質(zhì)粒；然后用⑤DNA聚合酶處理質(zhì)粒，使被切開(kāi)的質(zhì)粒末端連接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用④DNA連接酶處理質(zhì)粒，形成了的限制酶酶切割位點(diǎn)，這樣它可被②MetⅠ識(shí)別。

（3）圖中看出，圖中質(zhì)粒為環(huán)狀DNA，經(jīng)限制酶EcoRⅠ單獨(dú)切割后形成一條鏈狀DNA，說(shuō)明該酶在質(zhì)粒上有一個(gè)切割位點(diǎn)；而限制酶PstⅠ單獨(dú)切割，產(chǎn)生了兩條鏈狀DNA，說(shuō)明該酶在質(zhì)粒上有兩個(gè)酶切位點(diǎn)，并且兩個(gè)切點(diǎn)的距離為2.5kb；而兩種酶同時(shí)切割時(shí)產(chǎn)生三個(gè)DNA片段，即限制酶PstⅠ的酶切位點(diǎn)在11.5kb的DNA上，故切割位點(diǎn)如圖