Question

【題目】【生物-選修3：現(xiàn)代生物科技專題】已知pUC質(zhì)粒上攜帶有IacZ+基因的一段序列，編碼β-半乳糖苷酶的α肽。而宿主細胞含有IacZ+的突變基因，其產(chǎn)物無β-半乳糖苷酶活性，但遇α肽，可發(fā)生α-互補作用，產(chǎn)生有活性的酶，使培養(yǎng)基中的無色物質(zhì)X-Gal分解，菌落呈藍色；若將外源基因插入到質(zhì)粒上IacZ+序列中，失去α-互補作用（注：宿主細胞菌落為白色）。圖甲為pUC質(zhì)粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，tctR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子、T為終止子，ori為復制原點。圖乙表示目的基因的兩端分別有EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。為獲得目的菌株，請分析回答下列問題：

（1）為快速篩選目的基因，應將含有目的基因的DNA與pUC質(zhì)粒表達載體分別用 酶切，酶切產(chǎn)物用 進行連接后將得到的混合物直接導入受體菌中，培養(yǎng)受體菌有的未被轉(zhuǎn)化（用A表示），有的被轉(zhuǎn)化，被轉(zhuǎn)化的菌株有三種（B含環(huán)化目的基因的菌株 C含質(zhì)粒載體的菌株 D含插入了目的基因的重組質(zhì)粒的菌株）。

（2）為篩選出插入了目的基因的菌株，需要將宿主細胞接種在含有 的培養(yǎng)基中。

（3）在培養(yǎng)基中，不能生長的菌株為 ；產(chǎn)生藍色菌落的菌株為 ；產(chǎn)生白色菌落的菌株為 （請用（1）中的A、B、C、D字母作答）。

（4）基因工程中除質(zhì)粒作為基因載體外，還可用動植物病毒和 。

Answer 1

【答案】（除特殊標記外，每空2分，共15分）

（1）EcoRⅠ DNA連接酶

（2）（無色物質(zhì)）X-Gal和四環(huán)素（3分，寫不全0分）

（3）A、B C D

（4）λ噬菌體衍生物

【解析】（1）限制酶應同時能將目的基因和運載體切割，分析所給目的基因和運載體，應用EcoRI酶切，然后用DNA連接酶將目的基因和運載體進行連接，得到重組質(zhì)粒后導入到受體菌種。

（2）因為運載體中含有四環(huán)素的抗性基因，所以應在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上。并且含有重組目的基因的宿主細胞不會使無色物質(zhì)X-Gal分解，菌落呈白色，所以宿主細胞應放在無色物質(zhì)X-Gal和四環(huán)素的培養(yǎng)基中。

（3）在培養(yǎng)基上不能生長的應為A和B，即沒有抗性的。產(chǎn)生藍色菌落的應為含質(zhì)粒載體的菌株，即C，沒有插入外源基因的載體。而插入含有外源目的基因的重組質(zhì)粒應是白色的，即D。

（4）作為基因工程的運載體有質(zhì)粒、動植物病毒和λ噬菌體衍生物。