Question

4．如圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線．圖中tet^R表示四環(huán)素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三種限制酶．請據圖回答：
（1）從高表達人乳鐵蛋白的組織細胞中提取mRNA，通過逆轉錄過程獲得cDNA，用于PCR擴增．
（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因．篩選含有重組載體的大腸桿菌，首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行．
（3）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是A（填字母代號）．
A．啟動子       B．tet^R        C．復制原點       D．amp^R
（4）過程①可采用的操作方法是顯微注射法．進行過程②之前，需用相應的激素處理代孕牛，使其處于同期發(fā)情狀態(tài)．
（5）對早期胚胎進行切割，可獲得多個新個體，該種生殖方式是無性生殖（克�。�．
（6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用抗原-抗體雜交技術．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線，包括基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質粒導入受體細胞；過程②需采用胚胎移植技術．

解答 解：（1）以mRNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉錄．
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點，其中限制酶SmaI的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質粒后，會破壞質粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行．
（3）啟動子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列．
（4）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；進行胚胎移植前，需要用相應的激素處理代孕牛，使其處于同期發(fā)情狀態(tài)．
（5）來自同一個胚胎的后代具有相同的遺傳物質，因此胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一．
（6）檢測目的基因是否表達常用抗原-抗體雜交技術．
故答案為：
（1）逆轉錄   
（2）HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素　
（3）A
（4）顯微注射   同期發(fā)情　 
（5）無性生殖（克隆）　
（6）抗原-抗體雜交

點評 本題結合乳腺生物反應器培育過程圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱或采用的技術，同時能提取圖中有效信息答題．