Question

【題目】我國科學(xué)家張道遠先生通過從耐旱灌木白花檉柳中克隆得到TSOD基因，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)化到棉花中，獲得了具備更強抗旱性的T4代轉(zhuǎn)基因棉花株系．下圖為轉(zhuǎn)基因抗旱棉花的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答下列問題：
（1）①過程表示用擴增目的基因，該過程使用到的酶是 ．
（2）步驟③一般用處理農(nóng)桿菌，使其易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子．除圖中所示的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法外，還可采用方法將基因?qū)�入植物細胞�?/span>
（3）外植體培養(yǎng)成為試管苗的過程采用了技術(shù)，利用了的原理，步驟⑤⑥表示、 ．
（4）用兩種限制酶XbaI和SacI（兩種酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，獲得含目的基因的片段．若利用該片段構(gòu)建基因表達載體，應(yīng)選用圖中的何種Ti質(zhì)粒？
（5）為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素標(biāo)記的作探針進行分子水平鑒定，再進行個體水平鑒定棉花植株的抗旱性．

Answer 1

【答案】
（1）PCR技術(shù)；熱穩(wěn)定DNA聚合酶
（2）Ca2+（或CaCl2）；花粉管通道法（基因槍法）
（3）植物組織培養(yǎng)；植物細胞的全能性；脫分化；再分化
（4）甲
（5）抗旱基因（TSOD基因、目的基因）；移栽到干旱土地中
【解析】解：（1）①過程表示用PCR技術(shù)擴增目的基因，PCR技術(shù)中利用高溫解鏈，因此不需要解旋酶，但是需要熱穩(wěn)定性的DNA聚合酶．（2）步驟③中將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，一般用Ca2+處理農(nóng)桿菌，使其變?yōu)楦惺軕B(tài)，易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子．將目的基因?qū)�入植物細胞有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法等．（3）外植體培養(yǎng)成為試管苗常采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)能夠體現(xiàn)植物細胞的全能性的，步驟⑤⑥分別表示脫分化、再分化．（4）用兩種限制酶XbaI和SacI（兩種酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，獲得含目的基因的片段．甲、該Ti質(zhì)粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位點，且用這兩種酶切割可將目的基因插入T﹣DNA中，甲正確；乙、該Ti質(zhì)粒中不含限制酶SacI的切割位點，乙錯誤；丙、該Ti質(zhì)粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位點，但用這兩種酶切割不會將目的基因插入T﹣DNA中，丙錯誤；丁、該Ti質(zhì)粒中不含限制酶XbaI的切割位點，丁錯誤．故選：甲．（5）為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素標(biāo)記的抗旱基因（TSOD基因、目的基因）作探針進行分子水平鑒定，再移栽到干旱土地中進行個體水平鑒定棉花植株的抗旱性． 所以答案是：（1）PCR技術(shù) 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（2）Ca2+（或CaCl2） 花粉管通道法（基因槍法）（3）植物組織培養(yǎng) 植物細胞的全能性 脫分化 再分化（4）甲（5）抗旱基因（TSOD基因、目的基因） 移栽到干旱土地中
【考點精析】利用基因工程的原理及技術(shù)對題目進行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．