Question

【題目】嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β－葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗：

(1)PCR擴增BglB基因時，選用________基因組DNA作模板。

(2)上圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。BglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的BglB基因重組進該質(zhì)粒，擴增的BglB基因兩端需分別引入________和________不同限制酶的識別序列。

(3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為_______________________。

Answer 1

【答案】嗜熱土壤芽孢桿菌 NdeⅠBamH Ⅰ轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶

【解析】

本題考查基因工程的有關(guān)知識，意在考查考生識記能力、識圖能力和理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。

（1）由“嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β—葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶”可知，bglB基因存在于嗜熱土壤芽胞桿菌，因此從嗜熱土壤芽胞桿菌基因組文庫中獲取目的基因，然后采用PCR技術(shù)擴增bglB基因。

（2）在基因表達載體的構(gòu)建中，目的基因插入到啟動子和終止子之間，啟動子和終止子之間有Ndel、XbaⅠ、BamHⅠ三種限制酶識別和切割位點。據(jù)圖可知，終止子的兩端有XbaⅠ限制酶切割位點，因此不能使用XbaⅠ限制酶切割質(zhì)粒，故只能用Ndel和BamHⅠ限制酶切割質(zhì)粒。目的基因與質(zhì)粒具有相同的粘性末端才可以連接形成重組質(zhì)粒，所以目的基因兩端需分別引入Ndel和BamHⅠ的識別序列。

（3）轉(zhuǎn)基因大腸桿菌能降解纖維素，說明轉(zhuǎn)基因大腸桿菌中能分泌出有降解纖維素作用的BglB酶。