Question

【題目】白細(xì)胞介素是一類淋巴因子。研究人員將人白細(xì)胞介素的基因?qū)�入到酵母菌�?xì)胞中，使其分泌出有活性的白細(xì)胞介素。

（1）為增加白細(xì)胞介素基因的數(shù)量，可使用___________________技術(shù)，但前提是必須知道該基因的部分核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列_________________。

（2）為便于鑒別受體細(xì)胞中是否含有外源基因，攜帶外源基因的質(zhì)粒上應(yīng)有___________，還應(yīng)有____________________，以利于外源基因的表達(dá)。

（3）白細(xì)胞介素基因進(jìn)入酵母菌細(xì)胞內(nèi)，并且在其細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱為_________。在表達(dá)過(guò)程中，啟動(dòng)子需與____________________識(shí)別和結(jié)合，從而驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。

（4）為了能成功表達(dá)出白細(xì)胞介素，不使用細(xì)菌，而使用酵母菌細(xì)胞作為受體細(xì)胞，可能原因是__________________________________。

Answer 1

【答案】PCR 設(shè)計(jì)引物 標(biāo)記基因 啟動(dòng)子和終止子 轉(zhuǎn)化 RNA聚合酶 細(xì)菌細(xì)胞中無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工白細(xì)胞介素的細(xì)胞器

【解析】

分析題圖：圖示表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的切割位點(diǎn)，所以切割載體和目的基因時(shí)用限制酶EcoRⅠ與EcoR52，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組載體。基因表達(dá)載體含有目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等成分。

（1）基因工程中，擴(kuò)增目的基因的方法為PCR技術(shù)，但前提是必須知道基因的已知序列，以便設(shè)計(jì)引物。

（2）基因表達(dá)載體含有目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等成分，標(biāo)記基因的作用是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。啟動(dòng)子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端。因此啟動(dòng)子和終止子可利于外源基因的表達(dá)。

（3）在重組載體導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞之前，需用鈣離子處理酵母菌，使酵母菌稱為感受態(tài)細(xì)胞，白細(xì)胞介素基因進(jìn)入酵母菌細(xì)胞內(nèi)，并且在其細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱為轉(zhuǎn)化。在表達(dá)過(guò)程中，啟動(dòng)子需與RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合，從而驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。

（4）在體液免疫過(guò)程中，白細(xì)胞介素是由T淋巴細(xì)胞分泌的。由于細(xì)菌屬于原核生物，細(xì)胞中無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工白細(xì)胞介素的細(xì)胞器，因此為了能成功表達(dá)出白細(xì)胞介素，不使用細(xì)菌，而使用酵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞。