Question

13．胰島素是治療糖尿病的特效藥，現(xiàn)在常用基因工程的方法高效率地生產(chǎn)，流程大致如圖：

（1）要獲得人胰島素mRNA的人體某組織細(xì)胞是胰島B細(xì)胞．
（2）圖中3種限制酶PstⅠ、EcoRⅠ、Hind III切割質(zhì)粒的位點(diǎn)已用箭頭標(biāo)出．試問圖中②③④過程用到的酶依次是逆轉(zhuǎn)錄酶、限制酶PstⅠ、DNA連接酶．
（3）過程⑤的實(shí)際操作中，可能沒導(dǎo)入質(zhì)粒，也可能導(dǎo)入的是不含目的基因的普通質(zhì)粒，只有一部分導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒．根據(jù)培養(yǎng)基乙和丙中菌落判斷，b和f菌落的大腸桿菌中導(dǎo)入的是 重組質(zhì)粒，從功能上看這是一種選擇培養(yǎng)基．
（4）制備微生物培養(yǎng)基的一般操作順序是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌．
（5）目的菌落的純化培養(yǎng)時(shí)最常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．

Answer 1

分析 分析題圖：①是從人體某組織中獲取胰島素mRNA，②是逆轉(zhuǎn)錄過程，③是采用限制酶切割外源DNA獲得目的基因，④是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，⑤是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．

解答 解：（1）胰島素基因只在胰島B細(xì)胞中表達(dá)，因此要獲得人胰島素mRNA的人體某組織細(xì)胞是胰島B細(xì)胞．
（2）②為逆轉(zhuǎn)錄過程，該過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；③表示采用限制酶PstⅠ切割外源DNA獲得目的基因；④表示采用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA．
（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，青霉素抗性基因被破壞，而四環(huán)素抗性基因完好，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能抗四環(huán)素，但不能抗青霉素．根據(jù)培養(yǎng)基乙和丙中菌落判斷，b和f 菌落的大腸桿菌中導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒，從功能上看這是一種選擇培養(yǎng)基．
（4）制備微生物培養(yǎng)基的一般操作順序是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．對(duì)培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌．
（5）目的菌落的純化培養(yǎng)時(shí)最常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．
故答案為：
（1）胰島B細(xì)胞
（2）逆轉(zhuǎn)錄酶     限制酶PstⅠDNA連接酶
（3）b和f      選擇
（4）溶化      高壓蒸汽滅菌
（5）平板劃線法     稀釋涂布平板法

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程、微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記微生物分離和培養(yǎng)的過程，常用的接種方法等，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．